益智健腦顆粒對(duì)P8系快速老化小鼠顳葉蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 分析中藥益智健腦顆粒(YiZhiJianNaoKeLi,YZJNKL)干預(yù)P8系快速老化小鼠(Senescence Accelerated Mouse P8，SAMP8)顳葉組織的差異蛋白質(zhì)表達(dá)，從蛋白質(zhì)的角度探討中藥益智健腦顆粒防治阿爾茨海默病(Alzheimers disease，AD)的作用機(jī)理。 方法： (1)采用30只6月齡SAMP8隨機(jī)分為三組，一組為治療組(n=10)，灌服益智健腦顆粒濃縮液

2、；一組為模型組(n=10)，不予處理即處死；一組為對(duì)照組(n=10)，灌服等劑量雙蒸水。 (2)8周后，應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分別分離治療組、模型組、對(duì)照組SAMP8顳葉組織總蛋白，膠體考染顯色，Image Scan對(duì)膠體考染的2-DE膠掃描以獲取電子圖像，PDQuest圖像分析軟件比較分析三組的雙向凝膠電泳圖譜并識(shí)別差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，應(yīng)用基質(zhì)輔助

3、激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)得到相應(yīng)的肽質(zhì)量指紋圖譜 (peptide mass fingerprinting，PMF)，搜索數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)鑒定部分差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定。 結(jié)果： (1)建立了治療組、模型組和對(duì)照組SAMP8顳葉組織的2-DE

4、圖譜。 (2)比較分析三組SAMP8顳葉組織的2-DE圖譜，發(fā)現(xiàn)治療組與模型組存在37個(gè)差異蛋白點(diǎn)，其中有12個(gè)在治療組表達(dá)上調(diào)，17個(gè)表達(dá)下調(diào)，5個(gè)只在治療組表達(dá)，3個(gè)只在模型組表達(dá)；治療組與對(duì)照組之間的差異點(diǎn)同上述兩組基本相似；模型組與對(duì)照組無(wú)明顯差異。 (3)鑒定了治療組和對(duì)照組SAMP8顳葉組織的差異表達(dá)大于2倍的蛋白質(zhì)點(diǎn)如10個(gè)，如肌動(dòng)蛋白解聚因子-1、硫氧還原過(guò)氧化酶-6、肽基脯氨酸順?lè)串悩?gòu)酶A、二甲基精氨酸

5、二甲基氨基水解酶-1、電壓依賴性陰離子通道2、浮艦蛋白1、高遷移率族蛋白B1等。根據(jù)SWISS-PROT和NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中提供的信息，這些差異蛋白質(zhì)的功能涉及抗氧化應(yīng)激、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、分子伴侶及細(xì)胞骨架等，與阿爾茨海默病病變密切相關(guān)。 結(jié)論： (1)益智健腦顆粒可調(diào)節(jié)SAMP8顳葉組織多種蛋白質(zhì)表達(dá)，提示該方藥具有多靶點(diǎn)的作用。 (2)益智健腦顆粒可能通過(guò)抗氧化應(yīng)激、分子伴侶、調(diào)節(jié)NO、介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、維護(hù)細(xì)胞骨架等途