鋰-匹魯卡品誘導顳葉內(nèi)側(cè)癲癇模型及其P糖蛋白動態(tài)表達的研究.pdf

1、1.研究背景： 癲癇是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾患，其患病率約有5‰[1]。它是一種慢性進展性的腦功能障礙，其特點是周期性的不可預料的反復癲癇發(fā)作。盡管隨著科學的發(fā)展，癲癇的治療方法已取得長足的進步，合理、規(guī)則地服用抗癲癇藥物仍然是治療癲癇的主要手段。通過適當?shù)目拱d癇藥物治療，大多數(shù)的患者可達到完全控制發(fā)作。但是約30％患者雖經(jīng)合理的藥物治療，癲癇發(fā)作無法控制，對藥物產(chǎn)生了抵抗或發(fā)生了耐藥[2]。雖然對于“耐藥”或“藥物耐受”仍缺乏一

2、個明確的定義，但是目前比較公認的定義是“用目前的抗AEDs；在有效的治療期，合理用藥不能終止其發(fā)作或已被臨床證實是藥物難以治療的癲癇及癲癇綜合征”。臨床上藥物抗性癲癇以顳葉內(nèi)側(cè)癲癇尤為多見。 目前對于AEDs耐藥的病理生理機制還不是很明了，據(jù)研究有下列幾種假說：目標假說(藥效動力學理論：藥物作用靶點的改變)、多藥轉(zhuǎn)運體假說(藥代動力學理論：到達癲癇病灶藥物劑量改變)、神經(jīng)網(wǎng)絡假說(神經(jīng)病理性損害或網(wǎng)絡重構(gòu))、以及多種機制都涉及的

3、遺傳因素等。但是，藥物抗性癲癇的一個非常重要的特性就是對很多種抗癲癇藥物，有時幾乎是所有的藥物都產(chǎn)生耐藥，即使這些藥物具有不同的作用機制。這一現(xiàn)象是目標假說、神經(jīng)網(wǎng)絡假說及遺傳因素所無法解釋的，因而，多藥轉(zhuǎn)運體(multi-drug transporters，MDT)假說(藥代動力學理論)越來越成為研究藥物抗性癲癇的熱點。 P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是多藥轉(zhuǎn)運體的主要成員，是一種參與主動外排系統(tǒng)的跨膜糖蛋

4、白，參與了藥物藥代動力學的多個方面，而且現(xiàn)有的所有抗癲癇藥物幾乎都足P-gp的底物，因此現(xiàn)有的研究認為癲癇患者出現(xiàn)耐藥可能是通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)中P-gp的內(nèi)源性或獲得性的過度表達以減少藥物進入大腦的劑量，從而導致了藥物抗性癲癇的出現(xiàn)。 2.研究目的： 本研究主要目的是建立一個研究臨床上最常見的藥物抗性癲癇即顳葉內(nèi)側(cè)癲癇的平臺——構(gòu)建鋰-匹魯卡品誘導的大鼠慢性顳葉內(nèi)側(cè)癲癇(mesial temporal lobe epile

5、psy，MTLE)模型，并通過對不同時間點海馬不同分區(qū)P-gp表達的動態(tài)觀察，了解MTLE形成后P-gp表達的特征；通過以上的研究，為藥物抗性癲癇的治療及藥物開發(fā)提供更充分的實驗依據(jù)。 3.研究方法： 3.1構(gòu)建慢性顳葉內(nèi)側(cè)癲癇模型選擇6～8周雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠，予鋰-匹魯卡品誘導大鼠形成顳葉內(nèi)側(cè)癲癇慢性模型，對大鼠進行行為學觀察，并收集發(fā)作視頻資料及腦電記錄，尼氏染色觀察海馬硬化情況，以鑒定顳

6、葉內(nèi)側(cè)癲癇慢性模型是否構(gòu)建成功。 3.2檢測P-gp在各處理組中的表達情況用免疫組化及Western-Blot方法分別檢測P-gp在處理組、假處理組、空白對照組中不同時間點(1d及60d)海馬不同分區(qū)(CA1、CA3及DG)組織水平、蛋白水平上的表達情況。 4.研究結(jié)果： 4.1成功構(gòu)建了慢性顳葉內(nèi)側(cè)癲癇模型。87.5％(35/40)的大鼠在鋰-匹魯卡品誘導的急性期出現(xiàn)驚厥持續(xù)狀態(tài)，伴有與臨床癲癇全身發(fā)作類似的腦

7、電變化；慢性期出現(xiàn)自主發(fā)作，發(fā)作間期腦電記錄可見到癇性放電；模型鼠慢性期均出現(xiàn)海馬硬化的病理改變。 4.2通過對P-gp表達的動態(tài)研究，我們發(fā)現(xiàn)：與對照組相比，模型鼠急性期及慢性期在海馬CA1、CA3及DG區(qū)錐體細胞層神經(jīng)元上均出現(xiàn)P-gp的過度表達，增加約70％以上(p<0.05)。 5.結(jié)論： 5.1鋰-匹魯卡品誘導的慢性顥葉內(nèi)側(cè)癲癇模型具有與人類顳葉內(nèi)側(cè)癲癇類似的癲癇發(fā)作，并伴有相應的腦電圖改變；其海馬的病