真皮干細胞在創(chuàng)面修復中作用的初步研究.pdf

1、創(chuàng)面愈合是一個復雜的生物學過程,涉及多種修復細胞的增殖、遷移、分化、凋亡等過程,其可分為三個階段即:炎癥反應期、細胞增生期和組織重塑期。修復細胞是創(chuàng)面修復的主體,其生物學行為是創(chuàng)面愈合研究中的重要科學問題。研究表明,干細胞是組織自我更新和再生修復的細胞來源,其還通過分泌大量的細胞因子,促進肉芽組織形成、血管再生等修復過程。以往對表皮干細胞、毛囊干細胞與創(chuàng)面愈合的關系進行了較多研究,但對于原位真皮干細胞在創(chuàng)面愈合過程中的作用尚未完全闡明。

2、
　　本課題重點研究了小鼠全層皮膚損傷后創(chuàng)面局部真皮干細胞是否被激活及其在創(chuàng)面修復中的作用。首先采用BrdU標記法分別檢測全層皮膚損傷后創(chuàng)面局部修復細胞增殖反應的和標記滯留細胞(LRCs)的變化特點;進而分離和培養(yǎng)肉芽組織來源真皮干細胞,并通過與新生鼠真皮細胞和成年鼠真皮細胞在增殖能力、集落形成能力及多向誘導分化潛能等方面進行對比,研究了肉芽組織來源細胞的干細胞相關生物學特性;進一步通過檢測肉芽組織來源細胞和成年鼠真皮細胞內(nèi)活性氧

3、(ROS)含量及ROS對肉芽組織來源細胞集落形成能力及多向誘導分化潛能的影響,探討了ROS對創(chuàng)傷后真皮干細胞的調(diào)控作用,得到如下結果和結論:
　　1.采用短時間BrdU標記快速分裂細胞(RDCs)的方法檢測了創(chuàng)面局部修復細胞增殖反應情況,發(fā)現(xiàn)在正常皮膚組織中,僅表皮、毛囊組織中存在少量的RDCs,但在創(chuàng)傷后創(chuàng)面局部的表皮、毛囊和真皮組織均發(fā)生了明顯的細胞增殖反應,表明皮膚創(chuàng)傷后局部表皮、毛囊和真皮組織細胞參與了創(chuàng)傷修復。
　

4、　2.采用連續(xù)BrdU標記的方法檢測LRCs,發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面愈合后肉芽組織中存在LRCs,而正常的真皮組織中未檢測到LRCs,在分離被標記的肉芽組織來源細胞后的體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),肉芽組織來源細胞具有集落形成能力,且在形成的集落中也發(fā)現(xiàn)存在LRCs,提示創(chuàng)傷后真皮干細胞被激活并參與了肉芽組織的形成。
　　3.通過比較肉芽組織來源細胞、成年鼠真皮細胞和新生鼠真皮細胞的的生物學特性,發(fā)現(xiàn)肉芽組織來源細胞較成年鼠真皮細胞和新生鼠真皮細胞有更強的增殖

5、能力、集落形成能力和成骨、成脂誘導分化的能力,且表達間充質(zhì)干細胞表面標志CD105,不表達造血干細胞標志CD45,進一步支持創(chuàng)傷后真皮干細胞被激活并參與組織修復。
　　4.通過檢測內(nèi)源性ROS,發(fā)現(xiàn)肉芽組織來源細胞中ROS水平較正常成年鼠真皮細胞明顯增高(P<0.01),ROS清除劑NAC作用肉芽組織來源細胞后,其形成的集落數(shù)和集落的大小均顯著高于對照組(P<0.01),而成脂、成骨分化與對照組相比沒有明顯差異,提示創(chuàng)傷后內(nèi)源性R