楊樹胚性懸浮細胞系建立與原生質體融合研究.pdf

1、該研究以楊樹優(yōu)良無性系為材料,選擇組培苗葉片和莖段誘導愈傷組織,建立楊樹懸浮細胞系并植株再生,進而篩選原生質體分離的最佳條件;在此基礎上,應用PEG一高Ca2+高pH法開展楊樹原生質體成對融合,為創(chuàng)造楊樹新種質提供依據(jù).主要結論如下:1不同基因型材料的愈傷組織誘導率幾乎沒有差異.2,4-D濃度介于lmg/L和3mg/L之間,經(jīng)過5次調控繼代的愈傷組織,形成的愈傷組織由色澤淡黃而鮮艷的小顆粒組成,生長速度快,適宜建立胚性懸浮細胞系.2胚性

2、愈傷組織轉入液體培養(yǎng)基時,楊樹種不同建立穩(wěn)定的懸浮細胞系所需的時間相差不大.以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,附加1.0~2.0mg/L的2,4-D,懸浮細胞培養(yǎng)起始密度以40ml的液體培養(yǎng)基加入鮮重4g懸浮細胞,5~8d左右繼代一次有利于楊樹胚性懸浮細胞系的建立和保持.3在懸浮培養(yǎng)條件下,楊樹細胞先形成細胞團,再由一些胚性細胞團發(fā)育形成一個或幾個胚狀體.誘導胚狀體發(fā)生時較高濃度的BA可誘導胚性愈傷組織產(chǎn)生較多的胚狀體,低濃度的BA十NAA則可

3、促進胚狀體伸長.4酶液的成分組成與濃度對原生質體的游離有明顯影響.本實驗采用1.0％纖維素酶Cellulase RS、0.5％果膠酶Pectolyase Y23、0.5％半纖維素酶Hemicellulase和1.0％離析酶Macerozyme R-10組合酶液來游離原生質體,其中添加0.6mol/L甘露醇Mannitol、1470mg/LCaCl2·2H2O和95mg/L KH2PO4,pH值為5.8.5不同材料和不同取材時間對原生質體

4、產(chǎn)量和活力有顯著影響:采用繼代3d的懸浮細胞游離原生質體所得的產(chǎn)量最高;試管苗則采用繼代25d的葉片能獲得最高的產(chǎn)量,而且原生質體活力也最高;懸浮細胞游離原生質體得率和活力均明顯高于試管苗葉片游離的原生質體.酶解時間對原生質體產(chǎn)量和活力也存在影響:酶解8h的懸浮細胞原生質體產(chǎn)量基本上達到最高產(chǎn)量,酶解10h后,有些原生質體開始破裂,原生質體活力下降.滲透勢對游離原生質體的影響則不明顯.6 PEG-高Ca2高pH法誘導原生質體融合研究結果