血管內(nèi)皮生長因子、基質(zhì)蛋白酶基因多態(tài)性與上皮性卵巢癌的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的：血管內(nèi)皮生長因子（VEGF），又稱血管通透因子，它可以特異性地促進內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，增加血管通透性，促進血管的形成；基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一個高度鋅離子依賴的蛋白水解酶家族，它能引起基底膜消化、細(xì)胞游走、新基底膜的形成，促進新血管的形成。二者在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移的過程中起著十分重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)VEGF及MMPs基因中存在一些多態(tài)性位點可以通過調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄或蛋白的表達(dá)水平而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究旨在探討V

2、EGF-2578C/A和VEGF+936C/T及MMP-12-82A/G和MMP-13-77A/G單核甘酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNPs）與我國北方婦女上皮性卵巢癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系，從分子生物學(xué)水平為卵巢癌的預(yù)防及診治提供依據(jù)。
　　 方法：采用基于醫(yī)院的病例.對照研究方法，以256例卵巢癌患者和329例健康對照婦女為研究對象。采用蛋白酶K-氯化鈉鹽析法提取基因組DNA，聚合酶鏈反應(yīng)

3、.限制性片段長度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）分析方法，對VEGF-2578C/A、VEGF+936C/T、MMP-12-82A/G和MMP-13-77A/G4個SNPs進行基因分型。
　　 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS11.5版軟件包（SPSS Company，Chicago，Illinois，USA）

4、進行處理。正常對照組各基因型頻率分布行x2檢驗做Hardy-Weinberg平衡分析。病例組與對照組的年齡差異采用t檢驗，基因型和等位基因頻率分布比較采用x2檢驗，以非條件logistic回歸方法計算表示相對風(fēng)險度的比值比（odds ratio，OR）及其95％可信區(qū)間（confidence interval，CI）。采用EH軟件分析VEGF-2578C/A和VEGF+936C/T以及MMP-12-82A/G和MMP-13-77A/G基

5、因單體型頻率，2LD軟件分析連鎖不平衡狀態(tài)。P<0.05作為差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.VEGF-2578C/A和VEGF+936C/T多態(tài)與上皮性卵巢的關(guān)系
　　 1.1 VEGF-2578C/A多態(tài)的基因型和等位基因頻率分布在上皮性卵巢癌組和對照組中無顯著性差異（P=0.42和P=0.64）。與A/A+C/A基因型比較，C/C基因型與上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)，OR值為0.87（95％CI=

6、0.63～1.21）。以病理類型、臨床分期或確診時年齡分層分析，VEGF-2578C/A的基因型和等位基因頻率在各組間分布也均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P值均大于0.05）。
　　 1.2 VEGF+936C/T多態(tài)的基因型和等位基因頻率分布在上皮性卵巢癌組和對照組中亦無顯著性差異（P=0.67和P=0.79）。與T/T+C/T基因型比較，C/C基因型與上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)，OR值為0.93（95％CI=0.65～1.32）。以病

7、理類型、臨床分期或確診時年齡分層分析，VEGF+936C/T的基因型和等位基因頻率在各組間分布也均未發(fā)現(xiàn)顯著性差異（P值均大于0.05）。
　　 1.3采用EH和2LD軟件分析發(fā)現(xiàn)VEGF-2578C/A和+936C/T SNPs間不存在連鎖不平衡關(guān)系（D'=0.15）。
　　 2.MMP-12-82A/G和MMP-13-77A/G多態(tài)與上皮性卵巢癌的關(guān)系
　　 2.1 MMP-12-82 A/G SNP的A/A

8、、A/G、G/G三種基因型頻率在卵巢癌組和對照組中分別為93.0％、7.0％、0和96.7％、3.3％、0，兩組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.04）；卵巢癌組G等位基因頻率顯著高于對照組，兩組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.04）。與A/A基因型相比，A/G基因型可顯著增加上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險（OR=2.19，95％CI=1.01～4.72）。根據(jù)確診年齡分層分析發(fā)現(xiàn)，與A/A基因型相比，A/G基因型可顯著增加<50歲上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險（O

9、R=3.00，95％CI=1.19～7.36）；根據(jù)病理類型和臨床分期分層分析發(fā)現(xiàn)，與A/A基因型相比，A/G基因型有增加低分化或晚期卵巢癌發(fā)病風(fēng)險的趨勢（OR=3.12，95％CI=0.97～10.61：OR=2.21，95％CI=0.95～5.12）。
　　 2.2 MMP-13-77 A/G SNP的A/A、A/G、G/G三種基因型頻率在卵巢癌組和對照組中分別為25.0％、51.6％、23.4％和20.7％、50.2％、2

10、9.2％，兩組相比無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.21）；A、G等位基因頻率在卵巢癌組和對照組相比亦無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.09）。與G/G基因型相比，A/A基因型有增加上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險的趨勢（OR=1.51，95％CI=0.94～2.41）；而A/G基因型并不能改變上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險。根據(jù)病理類型分層分析發(fā)現(xiàn)，與G/G基因型相比，A/A基因型可顯著增加粘液性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險（OR=9.88，95％CI=2.18～44.91），并有增加漿

11、液性卵巢癌發(fā)病風(fēng)險的趨勢（OR=1.86，95％CI=0.95～3.64）；根據(jù)臨床分期分層分析發(fā)現(xiàn)，與G/G基因型相比，A/G和A/A基因型均可顯著增加早期上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險（OR=1.95，95％CI=1.02～3.73；OR=2.62，95％CI=1.28～5.39）。
　　 2.3采用2LD軟件分析發(fā)現(xiàn)MMP-12-82 A/G和MMP-13-77A/G SNPs間存在連鎖不平衡關(guān)系（D'=0.51）。應(yīng)用EH軟件對

12、MMP-12-82 A/G及MMP-13-77 A/G SNPs進行單體型分析，結(jié)果顯示：MMP-12A/MMP-13G（53.3％）、MMP-12A/MMP-13A（45.0％）、MMP-12G/MMP-13G（0.9％）和MMP-12G/MMP-13A（0.8％）四種單體型分布在上皮性卵巢癌組與對照組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.VEGF-2578C/A和V：EGF+936C/T的基因多態(tài)

13、性可能與中國北方婦女上皮性卵巢癌遺傳易感性無關(guān)。
　　 2.與A/A基因型相比，攜帶MMP-12-82A/G基因型可以顯著增加中國北方婦女上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險，并與卵巢癌的病理類型及年齡有顯著關(guān)聯(lián)性，其可能是上皮性卵巢癌發(fā)病的潛在危險因素。
　　 3.與G/G基因型相比，攜帶MMP-13-77A/A基因型有增加中國北方婦女上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險的趨勢，并與卵巢癌的病理類型及臨床分期有顯著關(guān)聯(lián)，其可能增加上皮性卵巢癌的發(fā)