血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因多態(tài)性與非霍奇金淋巴瘤的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)是目前已知的作用最強(qiáng)的促血管生成因子之一，在生理性血管生成過程中(如胚胎發(fā)育、繁殖、傷口修復(fù)等)的作用是十分重要的。同時(shí)，VEGF對(duì)于腫瘤等病理過程也具有重要的調(diào)節(jié)意義，在腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過程中有重要作用。VEGF基因至少有30個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SingleNucleotide Polymorphism，SNP)位點(diǎn)，這些基因多態(tài)性可能

2、通過影響VEGF的轉(zhuǎn)錄或表達(dá)而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后。研究顯示-2578C和-1154G等位基因與增加乳腺浸潤(rùn)性癌風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，-1154G等位基因與黑素瘤腫瘤厚度、前列腺癌的發(fā)病和進(jìn)展及肺腫瘤內(nèi)VEGF高表達(dá)有關(guān)。近年研究表明VEGF與非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)惡性程度相關(guān)，但目前尚未見有關(guān)VEGF基因多態(tài)性與NHL關(guān)系的研究報(bào)導(dǎo)。本研究旨在探討該基因啟動(dòng)子區(qū)2578C/A以及3’非編碼區(qū)(

3、untranslated region，UTR)+936C/T SNP與NHL的關(guān)系。 方法：采用基于人群的病例-對(duì)照研究方法，收集431例NHL患者和400例健康對(duì)照個(gè)體的靜脈抗凝血5ml，以蛋白酶K消化—飽和氯化鈉鹽析法提取外周血白細(xì)胞DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)(polymerase chainreaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFL

4、P)方法檢測(cè)VEGF的基因型。NHL患者同時(shí)統(tǒng)計(jì)臨床分期、免疫分型、骨髓浸潤(rùn)情況及生存狀況等，對(duì)NHL患者根據(jù)其不同臨床參數(shù)進(jìn)行分層分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 1 1.5版軟件包(SPSS Company,Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。比較各位點(diǎn)基因型頻率的觀察值與預(yù)期值并進(jìn)行卡方檢驗(yàn)行Hardy-Weinberg平衡分析。病例組與對(duì)照組的基因型、等位基因型分布比較采用行×列表或四格表

5、卡方檢驗(yàn)。以非條件Logistic回歸法計(jì)算相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)。應(yīng)用Kaplan-Meieranalysis計(jì)算生存率。 結(jié)果： 1.健康對(duì)照組中的VEGF-2578C/A、+936C/T多態(tài)性位點(diǎn)的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。VEGF-2578C/A、+936C/T基因多態(tài)性分布在NHL

6、患者組與正常對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2分別為1.788、2.524；P值分別為0.409、0.283)。-2578C、A等位基因頻率及+936C、T等位基因頻率分布病例組與正常對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2分別為0.045、0.907；P值分別為0.83、0.341)。 2.根據(jù)NHL患者臨床特點(diǎn)進(jìn)行分層分析2.1 NHL患者男性及女性間VEGF.2578C/A、+936C/T基因多態(tài)性分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2分別為2.0

7、06、1.680；P值分別為0.367、0.432)。-2578C、A等位基因頻率及+936C、T等位基因頻率分布在NHL患者男性及女性間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2分別為1.703、0.685;P值分別為0.129、0.408)。 2.2 NHL患者VEGF-2578C/A多態(tài)性位點(diǎn)的基因型、等位基因在B及T細(xì)胞亞型間分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2分別為2.816、2.507；P值分別為0.245、0.1 14)。攜帶+936C/C基因

8、型在T細(xì)胞型患者(70.2％)高于B細(xì)胞患者(64.7％)，+936T/T基因型在T細(xì)胞患者(2.0％)低于B細(xì)胞患者(7.1％)，分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=5.187，P=0.033)。攜帶VEGF+936C/C基因型可能與部分T細(xì)胞淋巴瘤的臨床特征及預(yù)后相關(guān)。+936 C、T等位基因在T細(xì)胞及B細(xì)胞NHL患者間分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=3.383，P=0.067)。 2.3 NHL患者VEGF-2578C/A基因SNP的基因型分

9、布在Ⅰ、Ⅱ期組及Ⅲ、Ⅳ期組NHL患者間分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=3.63；P=0.163)。VEGF-2578C、T等位基因頻率在Ⅰ、Ⅱ期組及Ⅲ、Ⅳ期組NHL患者間分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2為0.350；P值為0.554)。VEGF+936C/C基因型在Ⅲ、Ⅳ期組(69.2％)高于Ⅰ、Ⅱ期組(62.9％)，+936T/T基因型在Ⅲ、Ⅳ期組(3.4％)低于Ⅰ、Ⅱ期組(8.3％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=5.242，P=0.027)，OR

10、值為0.37，95％CI為0.15-0.89，提示與+936C/C基因型相比，攜帶T/T基因型與低的臨床分期相關(guān)。+936C等位基因頻率分布在Ⅲ、Ⅳ期組(82.9％)高于Ⅰ、Ⅱ期組(77.3％)，+936T等位基因頻率分布在Ⅲ、Ⅳ期組(17.1％)低于Ⅰ、Ⅱ期組(22.7％)，兩組患者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=3.859，P=0.049)。攜帶+936T等位基因與低的臨床分期相關(guān)(OR=0.7，95％CI為0.49～1)。 2.

11、4 NHL患者VEGF-2578C/C基因型分布在有骨髓浸潤(rùn)組(64.0％)明顯高于無骨髓浸潤(rùn)組(50.4％)，C/A或C/A+A/A基因型頻率在有骨髓浸潤(rùn)組(分別為31.4％、36.0％)明顯低于無骨髓浸潤(rùn)組(分別為43.4％、49.6％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2值分別為7.230、7.810，P值分別為0.007、0.005)，應(yīng)用非條件logistic回歸模型進(jìn)一步分析提示：與CC型相比，攜帶CA或CA+AA基因型與減少骨髓浸潤(rùn)相

12、關(guān)(OR值及95％CI分別為0.57，0.38-0.86和0.57，0.39-0.85)。-2578C等位基因頻率在有骨髓浸潤(rùn)組(79.7％)高于無骨髓浸潤(rùn)組(72.1％)，A等位基因頻率在有骨髓浸潤(rùn)組(20.3％)低于無骨髓浸潤(rùn)組(27.9％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=6.509，P=0.01)，OR值為0.66，95％CI為0.48-0.91。提示攜帶A等位基因與減少骨髓浸潤(rùn)相關(guān)。VEGF+936C/C基因型在有骨髓浸潤(rùn)組(70.9

13、％)高于無骨髓浸潤(rùn)組(64.8％)，+936T/T基因型在有骨髓浸潤(rùn)組(2.2％)低于無骨髓浸潤(rùn)組(6.7％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=4.546，P=0.042)，OR值為0.31，95％CI為0.10-0.96，提示攜帶+936T/T基因型與減少骨髓浸潤(rùn)相關(guān)。+936C、T等位基因頻率分布在兩組患者間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=3.661，P=0.056)。 2.5 VEGF-2578C/A、+936C/T基因多態(tài)性分布在A組(無全身癥

14、狀)和B組(有全身癥狀，包括：發(fā)熱、消瘦、盜汗等)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2分別為1.400、2.715；P值分別為0.497、0.257)。-2578C、A等位基因頻率及+936C、T等位基因頻率分布在兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2分別為1.343、0.340；P分別為0.247、0.560)。 3.本組病例共43 1例，其中隨訪資料可作生存關(guān)系分析的391例，中位隨訪時(shí)間23月(1-180月)，隨訪期間發(fā)生疾病相關(guān)死亡172例。

15、應(yīng)用Kaplan-Meier analysis計(jì)算生存率，應(yīng)用多元回歸分析模型計(jì)算危害比。結(jié)果顯示VEGF-2578C/A、+936C/T基因多態(tài)性與NHL患者3年總生存率無關(guān)(P＞0.05)。結(jié)論： 1.VEGF-2578C/A、+936C/T基因多態(tài)性與NHL總發(fā)病無關(guān)。 2.VEGF-2578C/A、+936C/T基因多態(tài)性分布與NHL患者性別無關(guān)。 3.VEGF+936C/C基因型頻率在T細(xì)胞型NHL患者

16、高于B細(xì)胞型NHL患者，攜帶VEGF+936C/C基因型可能與部分T細(xì)胞淋巴瘤的臨床特征及預(yù)后相關(guān)。 4.攜帶+936T等位基因與NHL者低的臨床分期相關(guān)。攜帶+936T/T基因型與NHL患者低的臨床分期相關(guān)。 5.攜帶VEGF-2578 CA或CA+AA基因型及+936T/T基因型與減少骨髓浸潤(rùn)相關(guān)；攜帶-2578A等位基因與減少骨髓浸潤(rùn)發(fā)生相關(guān)。 6.VEGF-2578C/A、+936C/T基因多態(tài)性與NHL