低聚葡萄籽原花青素對(duì)異丙腎上腺素致小鼠-大鼠心室重構(gòu)的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的：心肌肥厚和心室重構(gòu)是導(dǎo)致心血管疾病死亡率升高的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素,深入探討心肌肥厚和心室重構(gòu)的發(fā)生機(jī)制、提出新的治療策略仍是國(guó)內(nèi)外心血管領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)皮下注射異丙腎上腺素(iso proterenol,ISO)誘導(dǎo)小鼠和大鼠心室重構(gòu)模型,研究低聚葡萄籽原花青素(oligomeric grape seed proanthocyanidins,GSP)對(duì)其是否具有保護(hù)作用,并對(duì)其抗氧化應(yīng)激機(jī)制和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行初步探討。

2、
　　方法皮下注射ISO致小鼠和大鼠心室重構(gòu)模型。研究?jī)?nèi)容分為兩部分,第一部分:研究GSP對(duì)ISO致小鼠心室重構(gòu)的逆轉(zhuǎn)作用并初步探討其氧化應(yīng)激機(jī)制。雄性昆明種小鼠,18-22g,隨機(jī)分為6組:空白對(duì)照組(control,CON,n=10),模型對(duì)照組(ISO組,n=10),GSP65mg/kg組,GSP130mg/kg組,GSP195mg/kg組和卡托普利(captopril,CAP)65mg/kg組。CON組皮下注射生理鹽水,其

3、余各組均給予ISO1mg/kgsc,每天2次,間隔8h,連續(xù)7d。各給藥組均于造模第二天開(kāi)始灌胃給藥,給藥容積為0.1ml/10g,每天一次。CON組和ISO組僅給予等體積的蒸餾水,連續(xù)灌胃2wk。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)計(jì)算小鼠心臟重量指數(shù),HE染色和VG膠原染色觀察心肌組織病理學(xué)改變,黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分別測(cè)定血清中SOD活力和MDA含量。第二部分:研究GSP對(duì)ISO誘導(dǎo)的大鼠心室重構(gòu)是否具有保護(hù)作用并對(duì)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行初步探討。雄

4、性SD大鼠,體重180g-220g,隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組(control,CON,n=6),模型對(duì)照組(ISO組,n=6),GSP50mg/kg組,GSP100mg/kg組和GSP150mg/kg組。CON組皮下注射生理鹽水,其余各組均給予ISO5mg/kgsc,每日分3次注射,間隔4h,連續(xù)7d。各給藥組于造模第二天開(kāi)始灌胃給藥,給藥容積為0.5ml/100g,每天一次。CON組和ISO組僅給予等體積的蒸餾水,連續(xù)灌胃2wk。實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)束時(shí)用Powerlab系統(tǒng)監(jiān)測(cè)大鼠血流動(dòng)力學(xué)變化和心臟功能的改變,計(jì)算大鼠全心重量指數(shù)和左心重量指數(shù),HE染色和VG膠原染色觀察心肌組織病理學(xué)改變,黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分別測(cè)定血清中SOD活力和MDA含量,堿水解法檢測(cè)左心室心肌組織中HYP的含量,Westernblot檢測(cè)左心室心肌組織中凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(apotosis signal regulation kinase1,ASK1)、核因子-κB(NF-κB)和環(huán)氧合酶

6、-2(COX-2)的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果第一部分:GSP對(duì)ISO致小鼠心室重構(gòu)的影響
　　皮下注射ISO1wk后,可引起小鼠全心指數(shù)(heart weight/body weight,HW/BW)明顯增加,模型組心肌細(xì)胞橫截面積(cardiomyocytecross-sectionarea,CSA)、心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)(collagen volume fraction,CVF)、心肌血管周?chē)z原面積(perivascu

7、larcollagenarea,PVCA)以及血清中MDA含量與空白對(duì)照組相比明顯增加(P<0.05,P<0.01vsCON組),而SOD活力明顯下降(P<0.05vsCON組)。經(jīng)GSP65、130、195mg/kg治療后,各劑量組可明顯降低心臟指數(shù)(P<0.05,P<0.01vsISO組),抑制CSA的增加(P<0.01vsISO組)和CVF的升高(P<0.01vsISO組),增加SOD活力(P<0.05vsISO組)并降低MDA含

8、量(P<0.05vsISO組)。
　　第二部分:GSP對(duì)ISO致大鼠心室重構(gòu)的影響
　　皮下注射ISO1wk后,可引起模型組大鼠左室壓力最大下降速率(maximal rate of left ventricul ardiastolic pressure,-dp/dtmax)和左心室舒張末期壓(left ventricul arend diastolic pressure,LVEDP)明顯升高,左室壓力最大上升速率(maxim

9、al rate of left ventricul arsystolic pressure,+dp/dtmax)明顯降低,而左室收縮壓(left ventricul arsystolic pressure,LVSP)和心率(heart rate,HR)無(wú)明顯變化,表明模型組大鼠左心室的舒張功能減弱,心肌的順應(yīng)性降低。而經(jīng)過(guò)GSP50,100,150mg/kg治療2wk后,各組大鼠的心室舒縮功能明顯改善。
　　與空白對(duì)照組相比,模型

10、組大鼠的全心指數(shù)(heartweight/bodyweight,HW/BW)、左心指數(shù)(left ventricular weight/body weight,LVW/BW)明顯增加,表明心臟發(fā)生大體上的重構(gòu);模型組大鼠心肌細(xì)胞橫截面積(cardiomyocyte cross-section area)、心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)(collagen volume fraction,CVF)、心肌血管周?chē)z原面積(peri vscular co

11、llagen area,PVCA)、心肌組織中羥脯氨酸含量(hydroxy proline,HYP)以及血清中MDA含量與空白對(duì)照組相比明顯增加(P<0.05,P<0.01vsCON組),而血清中SOD活力明顯降低(P<0.05,P<0.01vsCON組)。皮下注射ISO1wk后,大鼠左心室心肌組織中ASK1、NF-κB和COX-2的表達(dá)均明顯上調(diào)。經(jīng)GSP50、100、150mg/kg治療后,各劑量組均能明顯降低全心指數(shù)和左心指數(shù),可

12、抑制CSA的增加,CVF和PVCA的升高,抑制大鼠左心室心肌組織中HYP含量的升高,增加血清中SOD活性并降低MDA含量,下調(diào)左心室心肌組織中ASK1、NF-κB和COX-2的蛋白表達(dá),并呈現(xiàn)出一定的劑量依賴(lài)趨勢(shì)。
　　結(jié)論GSP可明顯逆轉(zhuǎn)ISO誘導(dǎo)的小鼠和大鼠心室重構(gòu)作用,并且這種逆轉(zhuǎn)作用呈現(xiàn)出一定的劑量依賴(lài)趨勢(shì);GSP逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)的作用可能與其降低機(jī)體的氧化應(yīng)激水平并下調(diào)氧化應(yīng)激敏感的激酶ASK1、NF-κB及其下游基因COX