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1、目的:研究hsa-miR-143對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O的生物學(xué)功能的影響,尋找并鑒定Hsa-miR-143的靶基因,研究hsa-miR-143對(duì)腎透明細(xì)胞癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響,從而初步探討hsa-miR-143在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制。
方法:1、體外轉(zhuǎn)染hsa-miR-143及NC(陰性對(duì)照),48h后進(jìn)行細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)證實(shí)hsa-miR-143對(duì)786-O細(xì)胞粘附能力的影響;2、體外轉(zhuǎn)染hsa-miR-14
2、3及NC,48h后進(jìn)行Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)證實(shí)hsa-miR-143對(duì)786-O細(xì)胞遷移能力的影響;3、通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)軟件Targetscan等預(yù)測(cè)hsa-miR-143的潛在靶基因,Luciferase實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證hsa-miR-143是否能與靶基因3'-UTR結(jié)合;4、Western Blot實(shí)驗(yàn)證實(shí)hsa-miR-143對(duì)靶基因及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白的影響。
結(jié)果:1、轉(zhuǎn)染Hsa-miR-143后,786-O細(xì)
3、胞的粘附數(shù)為49.9±8.8,NC組的786-O細(xì)胞的粘附數(shù)為79.7±9.0,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)2、轉(zhuǎn)染Hsa-miR-143后,786-O細(xì)胞的遷移數(shù)為71.5±9.0,NC組786-O細(xì)胞的遷移數(shù)為104.4±12.1,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);3、將hsa-miR-143的靶基因確定為KRAS,Luciferase實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證hsa-miR-143能夠與KRAS的3'-UTR結(jié)合;4、Western
4、 Blot實(shí)驗(yàn)顯示,轉(zhuǎn)染hsa-miR-143后786-O細(xì)胞中的KRAS表達(dá)量下降,E-cadherin(上皮型鈣黏蛋白)表達(dá)升高,Vimentin(波形蛋白)及N-cadherin(神經(jīng)性鈣粘附蛋白)表達(dá)下降。
結(jié)論:在腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中,hsa-miR-143起到了抑癌基因的作用,此作用是通過(guò)抑制腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞粘附、遷移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化實(shí)現(xiàn)的。在腎透明細(xì)胞癌中,hsa-miR-143能夠靶向調(diào)控KRAS的表達(dá)。本實(shí)
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