HIF-VEGF-Notch信號通路相關(guān)因子在腎缺血再灌注損傷后的表達(dá)變化.pdf

1、目的和意義：
　　 腎缺血再灌注損傷(Ischemia reperfusion injury，IRI)是造成急性腎功能衰竭的主要原因之一，常見于機(jī)體大量失血、腎部分切除、腎移植以及腎實(shí)質(zhì)切開取石等過程中。盡快恢復(fù)缺血區(qū)的血供是促進(jìn)腎缺血損傷修復(fù)的關(guān)鍵，積極探討腎缺血再灌注損傷后血管新生具有重要意義。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)：HIF-VEGF信號通路和Notch信號通路對血管新生具有重要調(diào)控作用；D114為Notch配體之一，是一種重要的血

2、管新生調(diào)節(jié)因子；VEGF高表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)下游基因D114和Notch1的表達(dá)上調(diào)；腎缺血再灌注損傷后會發(fā)生代償性的血管新生。最新研究發(fā)現(xiàn)特異性的miR-210在組織缺血、缺氧后表達(dá)上調(diào)，通過調(diào)控其靶基因促進(jìn)血管新生。我們推測：HIF-VEGF-Notch信號通路可能是腎缺血再灌注損傷后介導(dǎo)血管新生的主要信號調(diào)控通路；miR-210可能通過參與調(diào)控HIF-VEGF-Notch信號通路來促進(jìn)血管新生。
　　 本研究通過制作小鼠腎缺血

3、再灌注損傷模型，觀察腎缺血組織中HIF-VEGF-Notch信號通路相關(guān)因子的表達(dá)變化，并探討其在腎缺血再灌注損傷后血管新生中的作用，以期為缺血性腎損傷的臨床治療提供新思路。
　　 研究內(nèi)容和方法：
　　 1、通過夾閉Balb/c小鼠雙側(cè)腎蒂45min來建立急性腎損傷模型。于腎缺血再灌注(IR)后4h、1d、3d處死小鼠，留取腎組織和血清標(biāo)本待檢。
　　 2、通過觀察血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的變化和腎

4、組織病理改變來判斷急性腎損傷模型是否成功。
　　 3、采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測miR-210、HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、D114mRNA、Notch1mRNA、Hes1mRNA的表達(dá)變化，采用Western Blot方法檢測HIF-1α、Notch1、Hes1蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、急性腎損傷模型成功標(biāo)志：肌酐(Cr)在IR后4h、1d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.

5、05)，分別為40.2±3.5μmol/L、90.00±3.81μmol/L；尿素氮(BUN)在IR后4h、1d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，分別為16.88±1.31 mmol/L、38.86±5.11mmol/L；腎組織通過HE染色結(jié)果顯示病理改變明顯。
　　 2、腎缺血再灌注損傷后HIF-VEGF-Notch信號通路相關(guān)因子的表達(dá)變化：
　　 (1)實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果顯示：miR-210在I

6、R4h、1d、3d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，分別為1.29±0.06倍、2.55±0.15倍、1.8±0.13倍；HIF-1αmRNA在IR4h、1d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，分別為4.57±0.52倍、3.15±0.46倍；VEGFmRNA在IR4h、1d、3d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，分別為4.33±0.22倍、3.35±0.22倍、2.51±0.20倍；D114mR

7、NA在IR4h、1d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，分別約為4.31±0.38倍、2.77±0.36倍；Notch1mRNA在IR4h、1d、3d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，分別為6.65±0.28倍、4.53±0.23倍、2.37±0.24倍；Hes1mRNA在IR4h、1d、3d組均明顯高于sham組(P<0.05)，分別為3.4±0.24倍、5.58±0.28倍、2.27+0.16倍。
　

8、　 (2)Western Blot結(jié)果顯示：HIF-1α蛋白在IR4h、1d、3d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，HIF-1α/β-actin灰度比值分別為1.54±0.08、3.08±0.23、1.69±0.08；Notch1蛋白在IR4h、1d、3d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，Notch1/β-actin灰度比值分別為0.81±0.05、1.07±0.05、0.75±0.07；Hes1蛋白在IR

9、4h、1d、3d組表達(dá)水平均明顯高于sham組(P<0.05)，Hes1/β-actin灰度比值分別為0.74±0.06、0.91±0.07、1.09±0.07。
　　 結(jié)論：
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腎缺血再灌注損傷后miR-210、HIF-1α、VEGF、D114、Notch1、Hes1的表達(dá)變化發(fā)生顯著上調(diào)。研究結(jié)果提示，腎缺血再灌注損傷后miR-210可能通過調(diào)控HIF-VEGF-Notch信號通路來參與血管新生的調(diào)