腺病毒介導(dǎo)的AdPF4-,17-70- cDNA的抗腫瘤作用的研究.pdf

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文腺病毒介導(dǎo)的AdPF4 cDNA的抗腫瘤作用的研究姓名：吳立華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：韓忠朝20040401中圍悱乖I 醫(yī)科人學(xué)壩I 。畢業(yè)論文胞病毒D N A 再行P C R 檢測(cè)有目的基因存在，證明已成功獲得含P F 4 m m c D N A 的重組腺病毒。后反復(fù)感染2 9 3 細(xì)胞經(jīng)三次大量擴(kuò)增，收取上清，經(jīng)氯化銫密度梯度純化后用T C I D 。( L i s s u ec u i

2、t l J r ei n f e c t i O U S d o s e5 0 ) 方法測(cè)病毒滴度。用A dP F 4 。。、A d l ．a(chǎn) c Z 分別感染K B 細(xì)胞，用W e s t e r n b l o t 印跡分析法分析細(xì)胞上清目的蛋白表達(dá)情況，用A d L a c Z 感染K B 細(xì)胞經(jīng)X - g a l 染色檢測(cè)該腺病毒對(duì)K B 細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，細(xì)胞記數(shù)法檢測(cè)感染了A dP F 4 。。、A d L a c Z 的人臍

3、靜脈內(nèi)皮細(xì)胞( H U V E C ) 增殖受抑制情況，皮下移植瘤模型治療實(shí)驗(yàn)觀察A d P F 4 。，。，對(duì)K B 細(xì)胞裸鼠體內(nèi)生長(zhǎng)的抑制作用，免疫組化法比較移植瘤內(nèi)M V D ．結(jié)果經(jīng)測(cè)序穿梭質(zhì)粒中的信號(hào)肽和P F 4 。，。序列與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)一致，利用A d E a s y 一1 系統(tǒng)以細(xì)菌內(nèi)周源重組法可高效制各A dP F 4 ?，，病毒滴度1 x 1 0 “1 p f u ／m l 。用對(duì)照腺病毒A d L a c Z 檢測(cè)該C

4、 M V腺病毒對(duì)K B 細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率為8 0 ％。A d P F 4 ，，。l 感染的H D V E C 的細(xì)胞增殖受到明顯抑制，以A d L a c Z 做對(duì)照抑制率達(dá)5 8 ％。治療后2 周A dP F 4 + ，。治療組移植瘤體積[ ( 9 5 ．2 4 ±2 4 ．2 2 ) m m 。] 小于A d L a c Z 組[ ( 2 9 4 ．4 ±9 7 ．3 ) r a i n 3 ] 。顯示A d P

5、F 4 。。可明顯抑制K B 移植瘤的生長(zhǎng)( P < 0 ．0 1 ) 。A d L a c Z 及A dP F 4 + ，；，治療組組織切片內(nèi)每×2 0 0 倍視野M V D 分別為3 0 ．5 5 + 2 ．5 5 ，9 ．5 + 1 ．2 ，表明A dP F 4 m t 。治療可以明顯抑制腫瘤組織內(nèi)的血管形成( P < O ．0 0 1 ) 。結(jié)論P(yáng) F 4 一，能明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖；A dP F 4 盯．