頜下腺組織工程生物衍生支架材料的制備及生物學(xué)性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文頜下腺組織工程生物衍生支架材料的制備及生物學(xué)性質(zhì)的實(shí)驗(yàn)研究姓名：鄧春富申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王玉新20040301織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，并測(cè)量其孔徑大小，同時(shí)計(jì)算其孑L隙率。4制備頜下腺脫細(xì)胞基質(zhì)支架材料的浸提液，通過急性全身毒性試驗(yàn)，分析脫細(xì)胞后的生物衍生支架材料對(duì)機(jī)體的毒性作用。5通過體內(nèi)埋植試驗(yàn)觀察頜下腺脫細(xì)胞基質(zhì)支架材料對(duì)組織的影響，判斷該支架材料的組織相容性。6MTT比色法檢測(cè)頜下腺細(xì)胞與

2、支架材料體外復(fù)合培養(yǎng)第7天時(shí)的吸光度值(OD值)，測(cè)定波長(zhǎng)為490nm，檢測(cè)細(xì)胞的存活率，通過計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)增殖百分率，判斷該支架材料的細(xì)胞相容性。7應(yīng)用胰酶消化法進(jìn)行頜下腺細(xì)胞的分離、純化，然后進(jìn)行頜下腺細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。8將傳代培養(yǎng)的第2代細(xì)胞與頜下腺脫細(xì)胞基質(zhì)支架材料體外復(fù)合培養(yǎng)，第3、5、7天時(shí)，通過掃描電鏡觀察頜下腺細(xì)胞在支架材料上的生長(zhǎng)情況，細(xì)胞的表面形態(tài)及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果一、頜

3、下腺脫細(xì)胞基質(zhì)(SubmandibularGlandAcellularMamx，SGAM)支架材料的成分分析1組織形態(tài)學(xué)觀察：l％TritonX一100脫細(xì)胞后，光鏡下見細(xì)胞輪廓存在，細(xì)胞外觀形態(tài)無明顯變化。但細(xì)胞核有的固縮，有的碎裂，不規(guī)則，細(xì)胞核排列無序，呈現(xiàn)擁擠狀態(tài)；而3％TntonX—100脫細(xì)胞后的支架材料，頜下腺細(xì)胞成分完全消失，光鏡下見不到細(xì)胞核形態(tài)，粉紅色的膠原纖維排列較疏松，可見細(xì)胞脫除后遺留的陷窩，呈篩網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。2透

4、射電鏡觀察：l％TritonX一100脫細(xì)胞后，透射電鏡下見細(xì)胞膜破損，細(xì)胞器破壞、破碎，染色質(zhì)凝集，形成多個(gè)散在的碎塊，有的細(xì)胞核濃縮，并可見到半月狀的凋亡小體。3％TritonX一100脫細(xì)胞后，細(xì)胞器及細(xì)胞核消失，只見殘留的細(xì)胞輪廓，周邊可見不同方向走行的膠原纖維斷面。3掃描電鏡觀察：1％TritonX一100脫細(xì)胞后，細(xì)胞輪廓無明顯改變，但其表面細(xì)胞膜被破壞，表面不光滑，呈蜂窩狀改變。3％TritonX一100脫細(xì)胞后，見細(xì)胞完