苗藥復方二巖虎果湯藥效學及拆方研究.pdf

1、目的: 本研究的目的在于通過實驗研究確定二巖虎果湯的藥效及其藥效基礎上的最佳處方，優(yōu)化最佳提取方法，為進一步開發(fā)出新型治咳喘的藥物奠定實驗基礎。
　　方法: 采用小鼠濃氨水引咳法觀察二巖虎果湯的止咳作用，采用酚紅排泌法觀察其祛痰作用，采用豚鼠0.1％磷酸組胺和2%氯化乙酰膽堿等量混合液(1∶1)引喘法觀察其平喘作用，采用二甲苯致小鼠耳腫脹法觀察其抗炎作用；采用最大耐受量試驗，對二巖虎果湯的安全性進行初步評價；選擇小鼠止咳（濃氨水引

2、咳法）、抗炎（二甲苯致小鼠耳腫脹法）兩項藥理指標，考察二巖虎果湯的水、35％、55％、75％和95％乙醇五種提取溶劑提取物的藥效，選擇適宜的提取溶劑；采用撤藥分析法對二巖虎果湯進行拆方研究,比較各配伍組方對小鼠的止咳、抗炎藥理作用,觀察各味藥對整方藥效的影響；利用正交試驗設計，對二巖虎果湯進行拆方研究，選擇L16（45）正交表，以二巖虎果湯中4味藥為因素，分別選取原方藥量的0、0.5、1、1.5倍量構成4個水平，對所得16個處方分別進行

3、止咳、抗炎藥理實驗，探討二巖虎果湯配伍機制；使用高效液相色譜法，Diamonsil（R）鉆石 C18柱(5μm，250×4.6 mm)，甲醇:水(50:50)為流動相，流速為1.0ml·min-1，柱溫30℃，檢測波長330nm，建立二巖虎果湯中石吊蘭素的含量測定方法；采用正交設計法，以浸膏得率和石吊蘭素含量為指標，優(yōu)化二巖虎果湯的水提醇沉工藝，并對其止咳、抗炎作用進行藥效學驗證。
　　結果: 二巖虎果湯高、中劑量組能延長小鼠咳嗽

4、潛伏期，高、中、低三個劑量組均能降低小鼠3min內(nèi)咳嗽次數(shù)（P＜0.05）；二巖虎果湯高、中劑量組能增加小鼠氣管酚紅排泌量( P<0.05)；二巖虎果湯高、中、低三個劑量組均能延長豚鼠咳喘潛伏期（P＜0.05）；二巖虎果湯高、中、低三個劑量組均能降低小鼠耳腫脹率( P<0.05)。最大給藥量試驗結果表明：二巖虎果湯小鼠灌胃最大給藥量為160 g·kg-1·d-1，按此量計算相當于臨床成人口服一日等效劑量的80倍；二巖虎果湯小鼠腹腔注射最

5、大給藥量為40 g·kg-1·d-1。經(jīng)提取溶劑篩選，組方適宜提取溶劑為55%乙醇；經(jīng)撤藥拆方研究，方中各藥均對全方延長咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(shù)、降低小鼠耳腫脹率作用有貢獻，其作用強弱順序為：巖豇豆>巖白菜>果上葉>虎杖；通過正交拆方試驗配合多指標綜合評價，各味藥對綜合藥效的影響大小是：A（巖豇豆）> B（巖白菜）> C（虎杖）> D（果上葉），由方差分析及直觀分析綜合得出二巖虎果湯的最佳配比為A4B4C3D2，即巖豇豆45g、巖白菜4

6、5g、虎杖30g、果上葉15g。經(jīng)高效液相色譜法考察，石吊蘭素在5—25μg/ml范圍內(nèi)成良好線性關系，r=0.9997，平均回收率為99.72%。二巖虎果湯的吸水率考察結果顯示，浸泡時間為75min，吸水率為1.5倍；水提工藝的結果顯示，各因素對水提結果的影響大小為：C（提取時間）>A（加水量）>B（提取次數(shù)），確定最優(yōu)提取方法為A2B1C1，即加水量10倍，提取1次，每次1h；醇沉工藝的結果顯示，各因素對醇沉結果的影響大小為：B（醇

7、沉濃度）>A（藥液濃縮比例）>C（靜置時間），確定最優(yōu)提取方法為A3B2C1，即提取液濃縮至藥液比例為2:1，醇沉濃度為75%，靜置12h；藥效學驗證結果顯示，該水提醇沉法制備的藥液能延長小鼠咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(shù)、降低小鼠耳腫脹率( P<0.05)，與原提取方法相比，無顯著性差異（P>0.05）。
　　結論: 二巖虎果湯具有止咳、祛痰、平喘、抗炎作用；小鼠急性毒性試驗未見任何明顯不良反應。經(jīng)過撤藥分析，該方組方合理，方中各藥配