放射性碘標(biāo)記AnnexinV進(jìn)行體內(nèi)凋亡顯像的研究.pdf

1、[目的】 ①利用放射性碘標(biāo)記由南京大學(xué)醫(yī)藥生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室以基因工程技術(shù)構(gòu)建出的AnnexinV重組體。研究該顯像劑在S180肉瘤小鼠模型體內(nèi)分布和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，探索*I-AnnexinV用于體內(nèi)細(xì)胞凋亡顯像的可行性。 ②初步探討放射性碘標(biāo)記的AnnexinV和99Tcm-MIBI雙核素顯像在測(cè)定腫瘤細(xì)胞凋亡中的應(yīng)用價(jià)值。 ③采用125I作為示蹤劑，估算人體內(nèi)123I-AnnexinV的輻射吸收劑量，以此

2、來(lái)評(píng)價(jià)它的安全性。 [方法]①用1251標(biāo)記AnnexinV。 ②制備45個(gè)sl80肉瘤小鼠模型，每只小鼠尾靜脈注射37MBq／kg的~25I-AnnexinV，分別在注射后0min、5min、10min、30min、m、3h、6h、10h、24h頸動(dòng)脈放血處死各組動(dòng)物，取出小鼠心、肺、腎等各臟器并測(cè)量放射性計(jì)數(shù)，用DAS2．0軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。 ⑧一組荷瘤鼠用環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)S180肉瘤細(xì)胞凋亡，另一組注射O

3、．9％生理鹽水，作為對(duì)照。 ④采用凋亡顯像劑木I-AnnexinV對(duì)環(huán)磷酰胺組進(jìn)行SPECT顯像，通過(guò)劃感興趣區(qū)技術(shù)計(jì)算T／M值(腫瘤與對(duì)側(cè)肌肉放射性計(jì)數(shù)比值)。同時(shí)采用凋亡顯像劑*I-AnnexinV和腫瘤顯像劑99Tcm-MIBI(99Tern．2．甲基異丁基異腈)對(duì)荷S180肉瘤小鼠進(jìn)行雙核素SPECT顯像。 ⑤顯像結(jié)束后即刻頸動(dòng)脈放血處死小鼠，取出腫瘤瘤體，用免疫組化法分別測(cè)定腫瘤組織的bcl-2和Caspase

4、-3的表達(dá)水平。 ⑥用1251．AnnexinV作為示蹤劑，測(cè)定放射性碘標(biāo)記的AnnexinV在小鼠體內(nèi)各臟器放射性分布并換算至標(biāo)準(zhǔn)人體內(nèi)分布數(shù)據(jù)。按照醫(yī)學(xué)內(nèi)照射吸收劑量(MIRD)方法將其輸2X．Mirdose-3軟件，估算人體內(nèi)123I-AnnexinV和131I-AnnexinV的輻射吸收劑量。 [結(jié)果] ①體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)表明肝臟和腎臟是攝取*I-AnnexinV的主要臟器，各臟器中的放射性計(jì)數(shù)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)

5、逐漸降低，T／NT(單位質(zhì)量腫瘤組織的放射性計(jì)數(shù)／單位質(zhì)量非腫瘤組織的放射性計(jì)數(shù))隨著時(shí)間的延長(zhǎng)緩慢增加，且在6-10h達(dá)到峰值；②S180肉瘤小鼠的血藥動(dòng)力學(xué)參數(shù)與三室模型符合較好，快相半衰期Tma為2．04min，慢相半衰期Tl／2β為16．82min，第三相半衰期T1/2γ為332．61min。 ③環(huán)磷酰胺組荷S180肉瘤小鼠的'I-AnnexinVSPECT顯像顯示，靜脈注射后3h腫瘤即顯像，6h后腫瘤灶顯示清晰。用RO

6、I技術(shù)測(cè)得3、6、8h的T／M比值分別為2．63、4．48、2．82。注射99Tcm-MIBI后放射性呈全身均勻分布，腫瘤內(nèi)未見(jiàn)濃聚，隨時(shí)間延長(zhǎng)放射性均勻減弱。對(duì)照組注射’I-AnnexinV后6h腫瘤內(nèi)未見(jiàn)濃聚，注射99Tcm-MIBI后3．5h，腫瘤部位即顯影。 ④對(duì)照組的腫瘤細(xì)胞bcl-2蛋白表達(dá)強(qiáng)烈，bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率為40．2％～68．4％(中位數(shù)58．1％)；經(jīng)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞bcl-2蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯減弱，

7、bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率為18．9％～32．1％(中位數(shù)26．7％)；環(huán)磷酰胺組與對(duì)照組間bcl-2陽(yáng)性表達(dá)有統(tǒng)計(jì)意義上的差別(P<0．01，t=14．85)；對(duì)照組的腫瘤細(xì)胞Caspase-3蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯微弱，Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)率為18．2％～27．3％(中位數(shù)23．10％)，經(jīng)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞Caspase-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為52．4％～75．2％(中位數(shù)64．20％)；環(huán)磷酰胺組與對(duì)照組間Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)有

8、統(tǒng)計(jì)意義上的差別(P<0．01，t=21．12)。免疫組化結(jié)果與AnnexinV顯像結(jié)果相符。 ⑤1231-AnnexinV在各臟器吸收劑量較低。其中肝臟和腎臟是輻射吸收劑量最大的器官，其吸收劑量分別為2．77x10。mGy／MBq和2．71×10-3mGy／MBq，紅骨髓內(nèi)照射吸收劑量最低，約為1．78x10-5mGy／MBq，其它臟器的內(nèi)照射吸收劑量在1．5～10．5×104mGy／MBq之間，有效劑量為5．55×10-4m

9、Sv／MBq，相比之下，乃~I-AnnexinV的吸收劑量要高得多。 [結(jié)論】 總之，本論文是首次利用放射性碘標(biāo)記國(guó)內(nèi)制備的重組人AnnexinV，其中利用’I-AnnexinV和腫瘤顯像劑99Tcm．MIBI對(duì)荷S180肉瘤小鼠進(jìn)行雙核素SPECT顯像測(cè)定腫瘤細(xì)胞凋亡，采用1251作為示蹤劑估算人體內(nèi)123I-AnnexinV的輻射吸收劑量，還未見(jiàn)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道?，F(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：’I-AnnexinV能可靠地反映腫瘤