脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞在炎性痛覺過敏中的作用機(jī)制.pdf

1、目的：⑴研究鞘內(nèi)（i．t）注射米諾環(huán)素對(duì)完全氟氏佐劑（CFA）性關(guān)節(jié)炎性痛覺過敏的作用。⑵觀察CFA誘導(dǎo)的外周炎癥對(duì)脊髓促炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響和鞘內(nèi)注射米諾環(huán)素的作用。⑶觀察CFA誘導(dǎo)的外周炎癥對(duì)脊髓Pp38MAPK蛋白表達(dá)變化和米諾環(huán)素鞘內(nèi)注射對(duì)其表達(dá)的影響。 方法：①行為學(xué)研究蛛網(wǎng)膜下腔置管成功的雄性SD大鼠，在右踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射50μl CFA前30 min分別i．t生理鹽水（NS）或12．5、25、50μg不同劑量的

2、米諾環(huán)素，i．t每天1次，持續(xù)7d，觀察后爪熱刺激回縮潛伏期（PWTL）和機(jī)械縮足反射閾值（MWT）14 d。CFA致炎后2d、6d，i．t米諾環(huán)素50μg，觀察24 h PWTL和MWT變化；右踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射50μl NS前30 min i．t米諾環(huán)素50μg、NS20μl，觀察24 h的PWTL和MWT變化。②形態(tài)學(xué)研究蛛網(wǎng)膜下腔置管成功的雄性SD大鼠分別i．t NS和米諾環(huán)素50μg后30min右踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射CFA50μ

3、l，i．t每天1次，持續(xù)7d，觀察CFA后0、2、6d給藥后4h和13 d脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物OX—42、星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP、神經(jīng)元標(biāo)志物Fos的表達(dá)。③蛛網(wǎng)膜下腔置管成功的雄性SD大鼠分別i．t NS和米諾環(huán)素30min后右踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射CFA，i．t每天1次，持續(xù)7d，觀察CFA后4h，2、6d、13 d后爪PWTL和MWT的變化及CFA致炎后0，2、6d給藥后4h和13 d脊髓IL—1β、IL—6、TNF—α表達(dá)變

4、化。④蛛網(wǎng)膜下腔置管成功的雄性SD大鼠分別i．t NS和米諾環(huán)素30min后右踝關(guān)節(jié)外側(cè)皮下注射CFA，i．t每天1次，持續(xù)7d，觀察CFA后4h、2、6、13d的PWTL和MWT的變化及CFA致炎后0，2、6d給藥后4h和13 d脊髓Pp38MAPK蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果：⑴行為學(xué)研究結(jié)果i．t米諾環(huán)素不改變無炎癥大鼠的PWTL和MWT；CFA致炎后PWTL縮短、MWT減小，米諾環(huán)素抑制致炎后PWTL縮短和MWT減小似呈劑量依賴

5、性；預(yù)先及CFA致炎后2d米諾環(huán)素i．t可抑制PWTL縮短、MWT減小，第6d則無明顯影響。⑵形態(tài)學(xué)研究結(jié)果預(yù)先i．t米諾環(huán)素可以抑制CFA致炎后脊髓背角OX—42、GFAP、Fos的表達(dá)；CFA致炎后早期i．t米諾環(huán)素可以抑制脊髓背角OX—42、GFAP的表達(dá)；CFA致炎后后期i．t米諾環(huán)素可以減少脊髓背角OX—42表達(dá)，但不能抑制GFAP的表達(dá)。⑶CFA致炎后同側(cè)后肢PTWL縮短和MWT減小，預(yù)先和反復(fù)i．t米諾環(huán)素抑制PTWL縮短

6、和MWT的減??；CFA致炎后0，2、6d給藥后4h和13 d脊髓IL—1β、IL—6、TNF—α表達(dá)明顯增加，預(yù)先和反復(fù)i．t米諾環(huán)素減少相應(yīng)時(shí)點(diǎn)脊髓IL—1β、IL—6、TNF—α的表達(dá)水平。⑷CFA致炎后同側(cè)后肢PTWL縮短和MWT減小，預(yù)先和反復(fù)i．t米諾環(huán)素可以抑制PTWL縮短和MWT的減??；CFA致炎后0、2、6d給藥后4h和13d脊髓Pp38MAPK蛋白表達(dá)增加，預(yù)先和反復(fù)i．t米諾環(huán)素可以抑制相應(yīng)時(shí)點(diǎn)脊髓Pp38MAPK的

7、表達(dá)，但仍比基礎(chǔ)值增加。 結(jié)論：①外周注射CFA可以誘導(dǎo)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞激活；預(yù)先和反復(fù)鞘內(nèi)注射米諾環(huán)素可以抑制脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞激活，減輕炎性痛覺過敏；脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞可能參與炎性痛覺過敏的調(diào)節(jié)。②外周注射CFA誘導(dǎo)脊髓促炎性細(xì)胞因子分泌增加；預(yù)先和反復(fù)鞘內(nèi)注射米諾環(huán)素可以減少外周炎癥誘導(dǎo)的脊髓促炎性細(xì)胞因子分泌；脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞可能通過促炎性細(xì)胞因子介導(dǎo)炎性痛覺過敏。③外周注射CFA可以誘導(dǎo)脊髓Pp38MAPK表達(dá)增加；預(yù)先和反復(fù)鞘內(nèi)