預(yù)設(shè)靶標(biāo)免疫導(dǎo)向阿霉素治療小鼠S180肉瘤的初步研究.pdf

1、腫瘤是嚴(yán)重威脅人類生命和健康的常見(jiàn)病。據(jù)報(bào)道，全世界每年有700萬(wàn)人死于惡性腫瘤，約380萬(wàn)人接受化學(xué)藥物治療。化療仍是目前常用的癌癥治療手段之一。傳統(tǒng)的腫瘤化療療法，是通過(guò)各種途徑給藥，達(dá)到一定的血藥濃度后產(chǎn)生治療作用。臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，此療法通常早期緩解迅速，卻具有高復(fù)發(fā)率，且治療指數(shù)低，毒性高，常使許多病人產(chǎn)生嚴(yán)重甚至威脅生命的毒副反應(yīng)；另有部分患者則療效差，有的出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象。近年來(lái)，國(guó)際主流醫(yī)學(xué)對(duì)腫瘤的治療模式由先前的“尋找和破壞”

2、逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)椤鞍邢蚝涂刂啤保磳?duì)難以治愈的腫瘤患者進(jìn)行靶向治療，控制病灶的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，提高患者的生活質(zhì)量，延長(zhǎng)其生存期。其中藥物靶向治療已經(jīng)成為國(guó)際生物醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。藥物靶向治療，是指借助各種對(duì)腫瘤細(xì)胞有選擇性親和作用的物質(zhì)作載體，根據(jù)已知腫瘤發(fā)生中涉及的異常分子和基因，設(shè)計(jì)和研制針對(duì)特定分子和基因靶點(diǎn)的藥物，選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞而不損傷正常組織細(xì)胞的功能的治療方法。靶向藥物的傳遞必須通過(guò)三級(jí)靶向：首先，到達(dá)藥物一級(jí)靶-特定器官；再次

3、，到達(dá)二級(jí)靶-特定細(xì)胞；最后，到達(dá)三級(jí)靶-細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)。藥物靶向治療的效果取決于2個(gè)方面：①靶向藥物的自身特性；②腫瘤組織內(nèi)是否存在靶向藥物作用的靶點(diǎn)及其異常狀態(tài)。理想的腫瘤靶點(diǎn)需要具有以下特點(diǎn)：①是一種對(duì)惡性表型非常關(guān)鍵的大分子；②在重要的器官和組織中無(wú)明顯表達(dá)；③具有生物相關(guān)性；④能在臨床標(biāo)本中重復(fù)檢測(cè)；⑤與臨床結(jié)果具有明顯的相關(guān)性。但是許多腫瘤現(xiàn)在還沒(méi)有找到理想的靶點(diǎn)可用于靶向治療。因此，目前藥物靶向治療研究的首要熱點(diǎn)是尋找新的靶向

4、治療的靶點(diǎn)。 目前大量實(shí)驗(yàn)證明，在腫瘤內(nèi)直接注射經(jīng)過(guò)基因改造的沒(méi)有致病性的病毒、細(xì)菌后，由外周免疫引發(fā)的免疫記憶可以在瘤內(nèi)再次注射上述制劑后，迅速反應(yīng)，增加抗原提呈，促進(jìn)淋巴細(xì)胞分化，增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，有良好的抑瘤效果。同時(shí)，放射免疫治療提出了預(yù)設(shè)靶標(biāo)的放射免疫治療的新概念，提示了在腫瘤內(nèi)人為制造靶點(diǎn)進(jìn)行免疫治療的可行性，為治療腫瘤提供了又一新的方向，可能成為腫瘤防治研究的新的突破點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)采用小鼠抗人IgG為

5、載體偶聯(lián)阿霉素，在小鼠移植瘤內(nèi)注射人IgG作為預(yù)設(shè)靶點(diǎn)，通過(guò)抗原抗體特異結(jié)合靶向阿霉素進(jìn)入腫瘤組織，以探討預(yù)設(shè)靶點(diǎn)免疫導(dǎo)向治療的可行性。 目的：通過(guò)人為在腫瘤組織中制造人IgG非特異性靶點(diǎn)，制備小鼠抗人IgG-葡聚糖-阿霉素免疫靶向偶聯(lián)物，探討預(yù)設(shè)靶點(diǎn)免疫導(dǎo)向治療腫瘤的可行性。 方法： (1)90只清潔級(jí)昆明小鼠，雌性，無(wú)菌抽取傳代第12d的S180肉瘤小鼠腹水，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度達(dá)到1×107/1mL，取1ml接種于

6、8只昆明小鼠左側(cè)后肢近心端，82只昆明小鼠右側(cè)背部皮下，建立小鼠移植瘤模型。 (2)125I-NaI標(biāo)記人IgG單抗，分別在移植瘤內(nèi)注射游離125I-NaI和125I-人IgG偶聯(lián)物后，分別在ECT下靜態(tài)觀察0，1h、2h、4h、8h、24h、48h時(shí)放射性核素在腫瘤內(nèi)的分布情況。 (3)將葡聚糖、阿霉素(ADM)和小鼠抗人IgG按序化學(xué)合成，制備小鼠抗人IgG-葡聚糖-阿霉素偶聯(lián)物并測(cè)定；體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)MTT(四甲基

7、偶氮唑藍(lán)法)比較分析小鼠抗人IgG、游離阿霉素、小鼠抗人IgG一葡聚糖-阿霉素對(duì)S180細(xì)胞的毒性作用。 (4)取10只荷瘤小鼠，分為2組，ADM組和鼠抗人IgG一葡聚糖-阿霉素＋人IgG組，采用高效液相法(HPLC)測(cè)定給藥0.5h后腫瘤組織中阿霉素藥物濃度；取72只荷瘤小鼠，分為4組，比較空白對(duì)照、ADM、小鼠抗人IgG一葡聚糖-阿霉素、小鼠抗人IgG一葡聚糖-阿霉素＋人IgG的瘤重及對(duì)荷瘤小鼠生存時(shí)間的影響。 結(jié)果

8、：荷瘤小鼠模型制備成功，出瘤率98.75％；各時(shí)間點(diǎn)125I-NaI標(biāo)記的人IgG在腫瘤組織局部放射性計(jì)數(shù)較125I-NaI有顯著性差異(P=0.008、0.003、0.000、0.000、0.000、0.006<0.05)；單抗制備的偶聯(lián)物中，小鼠抗人IgG、葡聚糖與阿霉素物質(zhì)的量比為1:2.5:38；體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明，偶聯(lián)物對(duì)S180細(xì)胞有體外殺傷作用，ADM組與偶聯(lián)物組Ic50有顯著性差異(P=0.009<0.05)；ADM組

9、與小鼠抗人IgG組Ic50有顯著性差異(P=0.033<0.05)；偶聯(lián)物組與小鼠抗人IgG組Ic50有顯著性差異(P=0.033<0.05)；通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定ADM濃度在移植瘤組織中較對(duì)照組有顯著性差異(P=0.004<0.01)；小鼠抗人IgG一葡聚糖－阿霉素＋腫瘤中接種人IgG組對(duì)小鼠移植性S180肉瘤的抑瘤率達(dá)18.13％，與各對(duì)照組有顯著性差異(P=0.018<0.05，P=0.031<0.05，P=0.000<0.05