李屬壞死環(huán)斑病毒CN-Huairou分離物的初步研究及種苗傳毒風(fēng)險(xiǎn)模擬評(píng)估.pdf

1、李屬壞死環(huán)斑病毒(PNRSV)是我國1992年公布的進(jìn)境二類檢疫危險(xiǎn)性有害生物，本研究采用生物學(xué)、血清學(xué)和反轉(zhuǎn)錄PCR檢測方法對(duì)采集于北京核果主產(chǎn)區(qū)懷柔、平谷的櫻桃、杏、桃和李樹葉片共70份樣品進(jìn)行了檢測，結(jié)果在懷柔地區(qū)發(fā)現(xiàn)了李屬壞死環(huán)斑病毒。 將檢測陽性的櫻桃葉片的研磨汁液摩擦接種于鑒別寄主黃瓜上，分離得到該病毒的一個(gè)分離物，定為CN-Huairou。本研究對(duì)該分離物，通過RT-PCR擴(kuò)增、連接pMD18-T載體、轉(zhuǎn)化大腸桿菌

2、DH5α，克隆了該分離物的外殼蛋白基因片斷，并進(jìn)行了測序分析。 序列分析結(jié)果表明，李屬壞死環(huán)斑病毒CN-Huairou分離物與德國酸櫻桃上分離的Ring17和4-8同源性達(dá)到100％，該分離物核苷酸在第118～125bp間有6bp核苷酸序列差異，表現(xiàn)在氨基酸上為第39～42aa間有兩個(gè)氨基酸差異；該分離物CP基因的第62、81和126位氨基酸分別與PNRSVCH9血清型溫和致病型相應(yīng)氨基酸相同。將所獲得的分離物與47個(gè)其他地區(qū)的

3、分離物，特別是我國分離到的11個(gè)分離物進(jìn)行同源性和進(jìn)化樹分析，48個(gè)分離物的氨基酸序列同源性為89％～100％，我國12個(gè)分離物的同源性在93％～100％，屬于三個(gè)不同的組，除CN-Huairou、CN-Changli屬于Hammond劃分的表現(xiàn)溫和癥狀的GroupⅡ(PV96)，CN-Hangzhou屬于GroupⅢ(PE5)外，其他9個(gè)分離物均屬于GroupⅠ(PV32)，且分離物間不表現(xiàn)明顯的地域相關(guān)性或寄主相關(guān)性。 本研

4、究基于MonteCarlo模擬理論，利用Delphi7.0開發(fā)了有害生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估系統(tǒng)PRAS，該系統(tǒng)可以通過場景分析、數(shù)學(xué)模型構(gòu)建和隨機(jī)模擬對(duì)有害生物風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行定量評(píng)估。利用PRAS對(duì)種苗傳毒風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了模擬評(píng)估，不同引種數(shù)量、不同帶毒率對(duì)種苗傳毒風(fēng)險(xiǎn)的模擬評(píng)估結(jié)果表明，在10000次引種模擬中，達(dá)到種苗傳毒零風(fēng)險(xiǎn)需要滿足：種苗帶毒率在0～1％時(shí)，引種限量應(yīng)在0～250株；種苗帶毒率在1.1～2％時(shí)，種苗引種限量在0～100株；種苗帶毒率在