重癥肌無力胸腺樹突狀細胞對AChR抗原提呈作用的研究.pdf

1、重癥肌無力(MG)是以反復(fù)橫紋肌神經(jīng)肌肉無力為特點的自身免疫性疾病,其發(fā)病機制可能是由于機體產(chǎn)生的乙酰膽堿受體抗體(AChRab),作用于橫紋肌突觸后膜乙酰膽堿受體(AChR),競爭性抑制乙酰膽堿的作用.但關(guān)于自身抗原的來源及自身免疫反應(yīng)的激發(fā)爭議較多.近年研究認為胸腺與重癥肌無力關(guān)系密切,胸腺異常可能是MG發(fā)病及病情持續(xù)的重要環(huán)節(jié).進一步研究發(fā)現(xiàn)正常胸腺組織中有少量胸腺肌樣上皮細胞和胸腺樹突狀細胞(TDC),MG患者胸腺組織中二者數(shù)量

2、明顯增加,且并行排列于胸腺皮髓質(zhì)交界區(qū),被生發(fā)中心(GCs)外周的胸腺細胞包圍,從結(jié)構(gòu)上具備激發(fā)免疫反應(yīng)的條件.研究還證明胸腺肌樣上皮細胞能高表達和翻譯AChR蛋白的所有組成成分,其mRNA系列與橫紋肌突觸后膜上AChR蛋白的mRNA系列完全一致;而TDC作為機體內(nèi)最強的抗原提呈細胞(APC)之一,在重癥肌無力胸腺組織中增殖活躍的意義是什么?MG發(fā)病過程中是否有TDC活化?活化TDC能否提呈MG特異性抗原-胸腺組織中AChR蛋白?對這些

3、問題的解答將有助于揭示重癥肌無力的發(fā)病機制,闡明胸腺樹突狀細胞在重癥肌無力抗原提呈及發(fā)病中的作用,提出針對TDC活化過程的影響因素,應(yīng)用抑制TDC活化的細胞因子,達到預(yù)防和治療重癥肌無力的目的,具有深遠的理論意義和潛在的臨床應(yīng)用價值.基于對上述研究現(xiàn)狀的認識,本課題以重癥肌無力胸腺樹突狀細胞為中心,從以下幾方面進行了研究:(1)建立TDC體外原代培養(yǎng)方法,觀測細胞因子對胸腺樹突狀細胞生長情況的影響;(2)研究MG不同胸腺病理組織中TDC

4、生長差異,比較正常胸腺與MG胸腺組織中TDC表面標志及免疫共刺激分子的表達情況;(3)應(yīng)用ELISA法及RT-PCR方法,研究TDC在分化成熟過程中,IL-12及IFN-γ的產(chǎn)生及其mRNA的表達情況;(4)通過混合淋巴細胞反應(yīng)(Mixed Lymphocyte Reacion,MLR)檢測MG胸腺組織中TDC對AChR相關(guān)活性淋巴細胞(TB-2)的作用,闡明MG胸腺內(nèi)AChR蛋白與胸腺內(nèi)AChR相關(guān)淋巴細胞增殖之間關(guān)系;(5)應(yīng)用免疫

5、抑制因子IL-10與MG胸腺樹突狀細胞混合培養(yǎng),探討IL-10對TDC抗原提呈功能的影響.(6)測定不同病理類型MG患者血清抗AChR抗體及胸腺切除術(shù)后臨床療效進行隨訪,觀測TDC增殖與抗原提呈功能變化與血清抗AChR抗體和臨床療效之間的關(guān)系,為臨床治療重癥肌無力提供理論依據(jù).主要研究結(jié)果及結(jié)論如下:1.本研究采用機械破碎、金屬網(wǎng)過濾、梯度離心法,能夠從MG增生胸腺組織獲得足夠數(shù)量的胸腺低密度細胞,細胞因子GM-CSF+SCF組合能成功

6、誘導(dǎo)TDC成熟和分化;MG胸腺組織中TDC細胞增殖變化隨不同病理類型不同,其中以胸腺增生者最為明顯,胸腺萎縮和胸腺瘤患者次之,三者均明顯高于正常胸腺組織中TDC的數(shù)量;2.MG胸腺DC誘導(dǎo)分化成熟過程中,免疫組化及流式細胞學(xué)檢測,細胞表面免疫粘附分子HLA-DR、CD11c、CD11c、CD80、CD86、CD40和CD54的表達均明顯高于正常胸腺組中TDC;其培養(yǎng)上清中IL-12、IFN-γ的濃度以及TDC內(nèi)IL-12、IFN-γ m

7、RNA表達也高于正常胸腺組;MG胸腺組織中的TDC誘導(dǎo)成熟后,能明顯刺激TB-2細胞的生長,說明重癥肌無力TDC對AChR蛋白具有特異性抗原提呈作用;正常胸腺組織中雖有少量TDC生長,但對TB-2細胞無明顯的刺激作用.3.MG不同胸腺病理組織中TDC免疫功能強弱不同,胸腺增生組DC分化成熟過程中,細胞表面粘附分子CD11c表達率達63.14﹪,結(jié)合其它相關(guān)指標HLA-DR、CD80、CD86、CD40和CD54的表達水平與胸腺萎縮組和胸

8、腺瘤組比較有顯著差異,提示MG胸腺增生組TDC免疫功能最為活躍.4.免疫抑制因子IL-10誘導(dǎo)TDC后,不同病理類型MG胸腺樹突狀細胞的免疫及抗原提呈功能明顯減弱,說明細胞IL-10能明顯抑制TDC對AChR蛋白的抗原提呈功能,對預(yù)防的治療重癥肌無力發(fā)病可能具有積極作用.5.雖然不同胸腺病理組織MG患者臨床癥狀相似,但其病理變化、疾病的嚴重程度及胸腺切除術(shù)后療效差異非常明顯,MG胸腺病理改變是影響MG胸腺切除術(shù)后遠期生存的最重要因素,患

9、者遠期治療效果為胸腺增生>良性胸腺瘤>胸腺萎縮.MG患者血清中抗AchRab滴度及轉(zhuǎn)歸與胸腺組織內(nèi)TDC增殖程度有關(guān).通過本課題的系列研究并結(jié)合文獻分析,我們認為在MG發(fā)病過程中,胸腺組織(重點是胸腺肌樣上皮細胞)高表達的AChR蛋白,可能作用于胸腺樹突狀細胞,導(dǎo)致TDC細胞增殖與活化,識別并提呈AChR蛋白,在TDC增殖與活化的同時表達高水平的MHC-Ⅱ分子和多種共刺激分子,分泌IL-12和IFN-γ等細胞因子,共同作用于T細胞,使T