大鼠腦缺血再灌流時(shí)GDNF和星形膠質(zhì)細(xì)胞變化的研究.pdf

1、目的：觀察膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial cell line-derived neurotrophicfactor,GDNF)在大鼠腦缺血再灌流時(shí)分布特點(diǎn)，研究星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte)在大鼠腦缺血再灌流時(shí)形態(tài)改變和分布。方法：線栓法阻斷大鼠大腦中動脈（middle cerebral artery，MCA）2小時(shí)后，再灌流3小時(shí)、12小時(shí)、1天、2天、3天、5天制成腦缺血再灌流模型，每組5只。正常組大鼠3只、假手術(shù)組3只作

2、為對照組。HE染色評價(jià)缺血性腦損傷的組織學(xué)特點(diǎn)。免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC)染色觀察GDNF分布的特點(diǎn)和星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)、分布。結(jié)果：1.HE染色顯示再灌流3小時(shí),紋狀體、額頂皮質(zhì)有許多神經(jīng)元(neuron)呈現(xiàn)急性期改變,即神經(jīng)元腫脹和濃縮。再灌流12小時(shí)缺血區(qū)許多神經(jīng)元呈現(xiàn)不可逆變性改變即紅神經(jīng)元(red neuron)和鬼影神經(jīng)元(ghostneuron)。再灌流1天視前區(qū)出現(xiàn)梗死灶，即神經(jīng)

3、元、膠質(zhì)細(xì)胞及微血管壞死和凋亡，呈一片無結(jié)構(gòu)淡染區(qū)。再灌流2-5天，視前區(qū)梗死灶無顯著擴(kuò)大，紋狀體內(nèi)的神經(jīng)元大量丟失，額頂皮質(zhì)呈缺血性改變。2.正常組和假手術(shù)組未檢測到GDNF表達(dá)。再灌流3小時(shí)，缺血周邊區(qū)有大量GDNF弱陽性的神經(jīng)元和巨噬細(xì)胞(macrophage)。整個(gè)大腦皮質(zhì)有廣泛的GDNF弱陽性神經(jīng)元。再灌流12小時(shí)，海馬齒狀回顆粒下層(subgranular zone，SGZ)有一些GDNF中等陽性的細(xì)胞。再灌流1天，缺血周邊

4、區(qū)有較多的GDNF強(qiáng)陽性的細(xì)胞。再灌流2天，紋狀體內(nèi)有較多的GDNF強(qiáng)陽性細(xì)胞。再灌流3天，紋狀體、額頂皮質(zhì)GDNF陽性細(xì)胞數(shù)量明顯減少。再灌流5天，視前區(qū)及紋狀體無GDNF陽性細(xì)胞，大腦額頂皮質(zhì)有散在少量GDNF弱陽性的神經(jīng)元。在整個(gè)再灌流過程中GDNF陽性的細(xì)胞數(shù)在3小時(shí)達(dá)到高峰，后逐漸下降，各組與3小時(shí)比較P<0.01。3.腦缺血再灌流時(shí)，星形膠質(zhì)細(xì)胞呈反應(yīng)性、營養(yǎng)不良性、退行性三種形態(tài)。 再灌流3小時(shí),缺血周邊區(qū)出現(xiàn)少量反應(yīng)性星

5、形膠質(zhì)細(xì)胞。再灌流12小時(shí)，視前區(qū)有較多的反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞，并可見一些退行性星形膠質(zhì)細(xì)胞。再灌流24小時(shí)，視前區(qū)梗死灶周圍有較多GFAP陽性的星形膠質(zhì)細(xì)胞。再灌流3-24小時(shí)各組GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多不明顯，與正常組和假手術(shù)組相比無顯著性差異（P>0.01）。再灌流2天，星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量明顯增多，與再灌流3－24小時(shí)各組及對照組相比有顯著性差異(P<0.01)。再灌流3天，缺血周邊區(qū)有較多的反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞，缺血區(qū)可見少

6、量營養(yǎng)不良性星形膠質(zhì)細(xì)胞。再灌流5天，缺血周邊區(qū)反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起彼此連接形成膠質(zhì)網(wǎng)。結(jié)論：1.改良的短暫腦缺血再灌流模型是一種研究腦缺血再灌流損傷和評價(jià)臨床藥物治療較理想的模型。2.腦缺血再灌流損傷是一個(gè)漸進(jìn)的過程，額頂皮質(zhì)、紋狀體、視前區(qū)的缺血性損傷程度逐漸加重。3. 腦缺血時(shí)，變性、死亡的神經(jīng)元不表達(dá)GDNF，缺血周邊區(qū)和非缺血區(qū)神經(jīng)元GDNF表達(dá)明顯增強(qiáng)，提示GDNF有促進(jìn)神經(jīng)元存活的作用。4.活化的小膠質(zhì)細(xì)胞或巨噬細(xì)胞可