臺(tái)灣乳白蟻EG基因RNAi及其在纖維素酶活抑制中的應(yīng)用.pdf

1、白蟻(Blattodea:Isoptera)是利用纖維素類物質(zhì)最為成功的昆蟲。臺(tái)灣乳白蟻（Coptotermes formosanus Shiraki）是重要的木食性害蟲，在我國(guó)華南地區(qū)為害尤為嚴(yán)重，針對(duì)臺(tái)灣乳白蟻纖維素酶系統(tǒng)的酶抑制劑研發(fā)是潛在的臺(tái)灣乳白蟻治理方法。本研究通過研究?jī)?nèi)源纖維素酶內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖酶CfEG基因dsRNA、葡萄糖酸內(nèi)酯(GDL)、纖維二糖(CLB)、殼寡糖(COS)、殼聚糖(CTS)、曲酸(KA)、氧

2、化苦參堿(OM)、單寧酸(TA)、槲皮素(QT)和氟蟲脲等物質(zhì)對(duì)臺(tái)灣乳白蟻的濾紙酶活性(FPA)、內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖酶(EG)、β-葡萄糖苷酶(BG)、纖維二糖水解酶(CBH)活性的抑制作用，獲得了如下主要結(jié)果:
　　1、臺(tái)灣乳白蟻內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖酶基因RNAi
　　用150ng/頭、75ng/頭的dsCfEG對(duì)臺(tái)灣乳白蟻進(jìn)行注射處理，于24h、48h、72h測(cè)定CfEG基因表達(dá)水平均出現(xiàn)了顯著性下調(diào)(P＜0.

3、05)，纖維素酶的活性均顯著降低(P＜0.05)，注射150ng/頭dsCfEG處理組的抑制效果優(yōu)于注射75ng/頭dsCfEG處理組。
　　用1ug/cm2、2ug/cm2、5ug/cm2的dsCfEG處理濾紙后喂食臺(tái)灣乳白蟻，于1d、3d、5d、7d測(cè)定CEG基因表達(dá)水平均出現(xiàn)了顯著性下調(diào)（P＜0.05），纖維素酶的活性均顯著降低(P＜0.05)，喂食2ug/cm2 dsCfEG處理組的抑制效果優(yōu)于喂食1ug/cm2和5ug/

4、cm2 dsCfEG處理組。
　　2、對(duì)臺(tái)灣乳白蟻纖維素酶活性有抑制作用的化合物篩選
　　用1％ GDL、CLB、COS、KA、OM、TA溶液處理濾紙后喂食臺(tái)灣乳白蟻，于6h、12h、1d、3d、5d、7d測(cè)定纖維素酶活性，結(jié)果表明:6種化合物有效抑制臺(tái)灣乳白蟻纖維素酶的活性。6種化合物對(duì)FPA的抑制效果為:KA≥COS≥OM＞CLB≥GDL＞TA;對(duì)EG活性的抑制效果為:KA≥COS≥OM＞CLB≥GDL≥TA;對(duì)BG活性

5、的抑制效果為:GDL≥OM＞KA≥COS≥CLB＞TA;對(duì)CBH活性的抑制效果為:COS≥KA≥OM＞GDL≥CLB≥TA。
　　用GDL、CLB、COS、CTS、KA、OM、TA、QT與纖維素粉混合后喂食臺(tái)灣乳白蟻，于1d、3d、5d、7d測(cè)定纖維素酶活性，結(jié)果表明:8種化合物有效抑制臺(tái)灣乳白蟻纖維素酶的活性。8種化合物對(duì)FPA的抑制效果為:KA≥COS≥OM＞CLB≥GDL＞TA≥QT≥CTS;對(duì)EG活性的抑制效果為:KA＞C

6、OS＞OM＞CLB≥GDL＞CTS≥TA≥QT;對(duì)BG活性的抑制效果為:GDL≥OM≥KA＞COS＞TA≥CLB≥CTS≥QT;對(duì)CBH活性的抑制效果為:KA≥OM≥COS＞CLB≥CTS＞GDL≥TA≥QT。
　　3、對(duì)臺(tái)灣乳白蟻纖維素酶活性的聯(lián)合抑制作用
　　用ddH2O(1)、dsCfEG(2)、dsCfEG+COS(3)、dsCfEG+KA(4)、dsCfEG+氟蟲脲(5)處理濾紙后喂食臺(tái)灣乳白蟻，于1d、3d、5d

7、、7d測(cè)定纖維素酶活性。結(jié)果表明:(2)、(3)、(4)、(5)的FPA和EG活性均顯著降低（P＜0.05）。dsRNA與幾種化合物聯(lián)合喂食對(duì)FPA和EG活性的抑制效果均為:(5)＞(4)＞(3)＞(2)。
　　用ddH2O(1)、氟蟲脲(2)、氟蟲脲+COS(3)、氟蟲脲+KA(4)、氟蟲脲+COS+KA(5)、氟蟲脲+COS+KA+dsCfEG(6)處理濾紙后喂食臺(tái)灣乳白蟻，于1d、3d、5d、7d測(cè)定纖維素酶活性。結(jié)果表明:

8、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)的FPA和EG活性均顯著降低(P＜0.05)。dsRNA與幾種化合物聯(lián)合喂食對(duì)FPA的抑制效果為:(6)≥(5)≥(4)＞(3)＞(2);對(duì)EG活性的抑制效果為:(6)≥(5)＞(4)≥(3)＞(2)。
　　綜上所述，本研究合成的dsCfEG及葡萄糖酸內(nèi)酯、纖維二糖、殼寡糖、殼聚糖、曲酸、氧化苦參堿、單寧酸、槲皮素均對(duì)臺(tái)灣乳白蟻纖維素消化具有一定的抑制作用，可進(jìn)一步研制白蟻抑食劑及消化干擾劑，