小鼠肝星狀細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及其免疫學(xué)特性初探.pdf

1、肝星狀細(xì)胞(HSCs)又叫儲脂細(xì)胞，位于肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞之間，它儲存了體內(nèi)80％的維生素A，可通過自身的收縮調(diào)節(jié)肝竇血流，并合成細(xì)胞外基質(zhì)維持正常肝臟結(jié)構(gòu)。以往對它的研究主要是參與肝纖維化和肝硬化過程，而對其在肝臟免疫學(xué)方面的作用研究甚少。本研究旨在初步研究HSCs的免疫學(xué)特性。 第一部分、小鼠肝星狀細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定 目的：探索C57BL/10 小鼠肝星狀細(xì)胞（HSCs）分離、純化的可行方案，并評價(jià)依該法

2、分離所得HSCs的生物學(xué)特性。 方法：經(jīng)肝門靜脈先用不含鈣、鎂離子的Hanks 液充分灌洗，再以濃度為1 mg/ml的IV型膠原酶灌注C57BL/10 小鼠肝臟，完整分離后碾碎，37℃水浴振蕩30min，Percoll 連續(xù)密度梯度（60％）離心法分離、純化HSCs，臺盼藍(lán)染色檢測HSCs 活性，Desmin和α-SMA 免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定HSCs，光鏡觀察體外培養(yǎng)HSCs的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果：純化后每只小鼠HSCs 收獲

3、量約為(5.5±0.4)×105個(gè)，HSCs 純度>90％，HSCs細(xì)胞活率>90％，靜止和活化的HSCs 均表達(dá)Desmin，活化HSCs 表達(dá)α-SMA。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)建立的的分離純化方案可獲得高純度高活性的小鼠HSCs。 第二部分、小鼠肝星狀細(xì)胞免疫學(xué)特性的實(shí)驗(yàn)研究 目的：初步探討小鼠HSCs的免疫學(xué)特性。 方法：通過流式細(xì)胞儀檢測培養(yǎng)第2天（靜止態(tài)）、第7天（活化態(tài)）的星狀細(xì)胞表面免疫調(diào)節(jié)分子CD

4、40、CD80、CD86、MHC-I、MHC-II和B7-H1表達(dá)情況。 結(jié)果：靜止HSCs表面僅表達(dá)少量免疫調(diào)節(jié)分子，而活化HSCs表面免疫調(diào)節(jié)分子表達(dá)增加?；罨瘧B(tài)和靜止態(tài)HSCs兩者比較，其中MHCI(52.86±8.99％vs 5.29±3.98％)，有顯著性差異；MHCII(1.78±0.92％vs 0.81±0.23％)，無顯著性差異；CD40(15.59±6.00％vs 6.69±8.51％)，有顯著性差異；CD80