不同應(yīng)激對小鼠免疫防御功能的影響及其分子免疫學(xué)基礎(chǔ).pdf

1、研究表明應(yīng)激能夠影響動物和人體的免疫功能，機體免疫系統(tǒng)功能的紊亂是感染性疾病、腫瘤等發(fā)生或惡化的直接原因，故闡明應(yīng)激對免疫系統(tǒng)損傷的作用機制具有重要意義。動物模型具有資源相對易獲得、操作性強、涉及倫理道德問題相對較少等優(yōu)點，因此建立理想的應(yīng)激動物模型是研究得以深入的關(guān)鍵。我們應(yīng)用束縛應(yīng)激和熱應(yīng)激建立了兩種小鼠應(yīng)激動物模型，然后使小鼠染菌，通過比較應(yīng)激狀態(tài)下小鼠與正常小鼠的死亡率來研究兩種應(yīng)激對小鼠免疫防御功能的影響，并試圖從遺傳背景角度

2、揭示基因多態(tài)性與應(yīng)激狀態(tài)下免疫應(yīng)答強度的關(guān)系；通過應(yīng)激所導(dǎo)致的機體免疫器官損傷、血清中蛋白質(zhì)的變化及全血中金屬元素含量的變化幾個方面來揭示應(yīng)激對免疫防御功能影響的相關(guān)機制。 方法應(yīng)用束縛應(yīng)激和熱應(yīng)激建立了兩種小鼠應(yīng)激動物模型，然后使小鼠染菌，研究這兩種應(yīng)激對小鼠免疫防御功能影響，并通過以下幾個方面來研究應(yīng)激對免疫功能損傷的可能機制。 1.研究應(yīng)激對小鼠脾臟重量指數(shù)的影響，觀察接受應(yīng)激的小鼠脾臟的病理變化，闡述免疫防御功能

3、降低的構(gòu)效關(guān)系。 2.以已經(jīng)建立的動物模型為研究對象，采用PCR技術(shù)檢測以MudoEb5和MudoEb7為代表的小鼠H2-Eb位點等位基因的多態(tài)性，從遺傳多樣性的角度揭示基因多態(tài)性與應(yīng)激狀態(tài)下免疫應(yīng)答強度的關(guān)系。 3.采用SELDI-TOF-MS技術(shù)，運用弱陽離子交換芯片(WCX2)對小鼠血清蛋白質(zhì)指紋圖譜進行研究，探索不同類型的應(yīng)激對免疫功能影響的特點及物質(zhì)基礎(chǔ)。 4.采用原子吸收分光光度法檢測小鼠全血中鐵、鋅

4、、鈣、鎂四種元素含量，以揭示應(yīng)激過程中四種元素的代謝變化規(guī)律，探索應(yīng)激對免疫功能損傷的相關(guān)機制。 結(jié)果1.注射大腸埃希菌后束縛應(yīng)激組和熱應(yīng)激組小鼠死亡率顯著高于正常對照組小鼠(P＜0.01)，束縛應(yīng)激組和熱應(yīng)激組小鼠死亡率無明顯差異(P＞0.05)。 2.束縛應(yīng)激組、熱應(yīng)激組小鼠脾臟重量指數(shù)較正常對照組明顯減小(P＜0.01)，但兩個應(yīng)激組間無明顯差異(P＞0.05)。正常對照組小鼠脾臟白、紅髓結(jié)構(gòu)清楚，比例適中，脾小體

5、清晰可見，脾索中含有較多的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞；束縛應(yīng)激組和熱應(yīng)激組小鼠脾臟切片病理學(xué)改變相似，白髓比例減小、紅髓比例增大，脾小體有不同程度的縮小、分布及結(jié)構(gòu)不規(guī)則。 3.PCR結(jié)果：126只小鼠中，MudoEb5檢測陽性的有91只(72.22﹪)，MudoEb7檢測陽性的有75只(59.52﹪)。正常對照組小鼠MudoEb5和MudoEb7基因型與小鼠接受細(xì)菌攻擊后生存狀態(tài)間無明顯相關(guān)性(P＞0.05)；應(yīng)激組小鼠中除熱應(yīng)激組小

6、鼠MudoEb5基因型與小鼠接受細(xì)菌攻擊后生存狀態(tài)間存在明顯相關(guān)性(P＜0.05)外，其它均無明顯相關(guān)性。MudoEb5和MudoEb7交互作用對各組小鼠接受細(xì)菌攻擊后生存狀態(tài)的影響分析，結(jié)果表明在對小鼠免疫防御功能影響方面MudoEb5和MudoEb7之間不存在交互作用(P＞0.05)。 4.血清中檢測到的蛋白質(zhì)質(zhì)荷比(m/z)主要在1500～50000D范圍內(nèi)，尤其集中在2000～20000D范圍內(nèi)。三組共檢測出256個蛋白

7、質(zhì)峰，將正常對照組、束縛應(yīng)激組和熱應(yīng)激組三組同時進行比較，其中有45個蛋白質(zhì)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。束縛應(yīng)激組與正常對照組間有33個蛋白質(zhì)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，與正常對照組比較，束縛應(yīng)激組蛋白相對含量高的有17個峰，熱應(yīng)激組與正常對照組間有31個蛋白質(zhì)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，與正常對照組相比，熱應(yīng)激組蛋白相對含量高的有13個峰。經(jīng)主觀判定，束縛應(yīng)激組的典型差異峰的數(shù)量為9個，熱應(yīng)激組為11個。在束縛應(yīng)激組

8、與正常對照組間的9個典型差異峰中，束縛應(yīng)激組蛋白質(zhì)荷比為2871、3457、3682、3830、8029和11750六個蛋白的相對含量均明顯高于正常對照組(P＜0.005)，而熱應(yīng)激組相應(yīng)蛋白與正常對照組相比沒有明顯差異(P＞0.01)，束縛應(yīng)激組蛋白質(zhì)荷比為5342，5526，6114三個蛋白的相對含量均明顯低于正常對照組(P＜0.005)，熱應(yīng)激組相應(yīng)蛋白與正常對照組相比，除蛋白質(zhì)荷比為6114的蛋白無明顯差異外(P＞0.01)，其

9、它兩個蛋白相對含量均明顯低于正常對照組(P＜0.005)，在上述9個典型差異峰中，蛋白質(zhì)荷比為2871、3457、3682和8029四個蛋白的相對含量在束縛應(yīng)激組與熱應(yīng)激組間均有明顯差異(P＜0.01)；在熱應(yīng)激組與正常對照組間的11個典型差異峰中，熱應(yīng)激組蛋白質(zhì)荷比為7500、7600、78¨、7857、15598、15705和15812七種蛋白的相對含量均明顯高于正常對照組(P＜0.005)，而束縛應(yīng)激組相應(yīng)蛋白與正常對照組相比除蛋

10、白質(zhì)荷比為7600的蛋白相對含量明顯高于正常對照組外(P＜0.005)，其它蛋白與正常對照組相比均無明顯差異(P＞0.01)，熱應(yīng)激組蛋白質(zhì)荷比為4227，4261，4389，4424四個蛋白峰的相對含量均明顯低于正常對照組(P＜0.005)，束縛應(yīng)激組相應(yīng)蛋白與正常對照組相比，除蛋白質(zhì)荷比為4389蛋白相對含量明顯低于正常對照組外(P＜0.01)，其它三個蛋白相對含量與正常對照組相比均無明顯差異(P＞0.01)，在上述11個典型差異峰

11、中，蛋白質(zhì)荷比為4227、4261、7500、7600和7811五個蛋白的相對含量在熱應(yīng)激組與束縛應(yīng)激組間均有明顯差異(P＜0.01)。 5.束縛應(yīng)激組小鼠鐵、鋅元素含量均顯著低于正常對照組和熱應(yīng)激組(P＜0.01)，熱應(yīng)激組小鼠鐵、鋅元素含量與正常對照組相比均無明顯差異(P＞0.05)。束縛應(yīng)激組小鼠鈣元素含量顯著高于正常對照組和熱應(yīng)激組(P＜0.01)，熱應(yīng)激組小鼠鈣元素含量與正常對照組相比無明顯差異(P＞0.05)。束縛應(yīng)

12、激組和熱應(yīng)激組小鼠鎂元素含量明顯低于正常對照組(P＜0.05)。除束縛應(yīng)激組小鼠鐵與鋅含量有顯著相關(guān)性外(P＜0.01)，其它組小鼠鐵與鋅含量均無明顯相關(guān)性(P＞0.05)。 結(jié)論1.本實驗采用的束縛應(yīng)激和熱應(yīng)激均降低了機體的免疫功能，動物模型有效。并且這兩種應(yīng)激刺激對小鼠免疫防御功能損傷的程度相當(dāng)。 2.本實驗采用的兩種應(yīng)激均損傷了與小鼠免疫有關(guān)的物質(zhì)結(jié)構(gòu)，使小鼠的免疫功能發(fā)生了變化，其免疫功能的變化有構(gòu)效基礎(chǔ)，進一步

13、說明本實驗建立的兩種應(yīng)激導(dǎo)致小鼠免疫功能降低的動物模型有效。 3.MudoEb5可能參與了熱應(yīng)激狀態(tài)下的免疫調(diào)節(jié)，而MudoEb7可能對免疫調(diào)節(jié)的作用不大，兩種基因與束縛應(yīng)激狀態(tài)下的免疫應(yīng)答間的關(guān)系不大。 4.兩種應(yīng)激均可引起小鼠血清蛋白的變化，但兩種應(yīng)激引起小鼠血清蛋白差異是不同的，即兩種應(yīng)激導(dǎo)致免疫防御功能降低的物質(zhì)基礎(chǔ)可能不同。 5.束縛應(yīng)激可以導(dǎo)致小鼠全血中鐵、鋅元素含量降低，而熱應(yīng)激對全血中鐵、鋅元素含