苯與甲醛對(duì)小鼠胚胎的聯(lián)合毒效應(yīng)研究.pdf

1、目的： 觀察苯和甲醛對(duì)胚胎發(fā)育的聯(lián)合毒作用，并探討其聯(lián)合作用類型，為進(jìn)一步評(píng)價(jià)苯和甲醛對(duì)機(jī)體的遠(yuǎn)期危害提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。 方法： 1、采用體外全胚胎培養(yǎng)模型，將植入后8.5天昆明種小鼠胚胎與含苯、甲醛的小鼠即刻離心血清共培養(yǎng)48小時(shí)，結(jié)合HE染色等技術(shù)，觀察苯、甲醛單獨(dú)及聯(lián)合對(duì)小鼠胚胎生長(zhǎng)發(fā)育和組織器官形態(tài)分化的影響。 2、分離12d齡昆明種小鼠胚胎的肢芽和中腦細(xì)胞，應(yīng)用微團(tuán)培養(yǎng)技術(shù)，觀察苯對(duì)胚胎肢芽細(xì)

2、胞和中腦細(xì)胞分化和增殖的影響。 3、應(yīng)用恒溫旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)裝置對(duì)12天孕齡小鼠胚胎前肢芽進(jìn)行培養(yǎng)，觀察不同濃度的苯對(duì)肢芽發(fā)育和分化的影響。 結(jié)果： 1、體外培養(yǎng)48h的對(duì)照組和溶劑對(duì)照組的胚胎與體內(nèi)同期發(fā)育的胚胎一致(P>0.05)，苯對(duì)小鼠胚胎發(fā)育具有明顯影響，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系：苯為1mmol/L時(shí)，各生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)和器官分化指標(biāo)與對(duì)照組比差異無(wú)顯著性(P>0.05)；苯濃度為10mmol/L時(shí)，顱臀長(zhǎng)、頭長(zhǎng)小于對(duì)照

3、組 (P<0.01)，苯濃度為1000mmol/L時(shí)，各生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)和組織器官形態(tài)分化指標(biāo)均受到抑制，未見(jiàn)正常發(fā)育胚胎，畸胎發(fā)生率增高，可見(jiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)畸形，主要為中腦、后腦、前腦形態(tài)異常、體位異常及小頭等，并出現(xiàn)胚胎死亡。 2、甲醛能影響體外器官形成期的小鼠胚胎生長(zhǎng)發(fā)育，并具有一定的胚胎毒性，且呈現(xiàn)明顯的劑量—效應(yīng)關(guān)系，能誘發(fā)神經(jīng)管閉合不全、體位、胸部、心臟形態(tài)異常。 3、苯和甲醛聯(lián)合作用時(shí)，(10+3) mmol/L

4、組即能影響胚胎生長(zhǎng)發(fā)育，但對(duì)多數(shù)組織器官的形態(tài)分化無(wú)影響，隨著苯和甲醛的組合濃度升高，生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)和形態(tài)分化各指標(biāo)值均小于對(duì)照組(P<0.05)，卵黃囊直徑、顱臀長(zhǎng)、頭長(zhǎng)、體節(jié)數(shù)均明顯下降，胚胎形態(tài)分化指標(biāo)評(píng)分值下降，畸胎和死亡率更高。主要表現(xiàn)為頭部異常(腦膨出、腦裂、神經(jīng)管未閉)、心臟發(fā)育異常(停留在心管期和心包積液的出現(xiàn))、肢芽小、眼、耳、鰓弓和體位異常。鏡下發(fā)現(xiàn)，苯和甲醛可致胚胎臟層VYS內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，排列不規(guī)則。細(xì)胞失去極性

5、，出現(xiàn)變性、腫脹，胞漿出現(xiàn)空泡。 4、苯與甲醛對(duì)胚胎的致死效應(yīng)：27mmol/L甲醛致胚胎死亡率為12.5％，但加苯10、100mmol/L后，死亡率分別為33.3％和44.4％，9mmol/L甲醛對(duì)胚胎致畸率為13.3％，但加苯10、100mmol/L后，畸胎率分別為44.4％和77.8％?？梢?jiàn)二者對(duì)胚胎的毒性作用和致畸作用強(qiáng)度遠(yuǎn)超過(guò)二者單獨(dú)的效應(yīng)之和，說(shuō)明二者表現(xiàn)為協(xié)同毒作用。 5、苯對(duì)小鼠胚胎中腦及肢芽細(xì)胞的增殖和

6、分化均有抑制作用，并呈較明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系；對(duì)細(xì)胞分化的抑制作用大于對(duì)增殖的抑制作用。苯對(duì)肢芽細(xì)胞的半數(shù)分化抑制濃度(ID50)和半數(shù)增殖抑制濃度(IP50)分別為89.93mmol/L和396.77mmol/L，對(duì)中腦細(xì)胞的ID50和IP50分別為116.29mmol/L和831.46mmol/L。 6、苯濃度達(dá)到75mmol/L以上時(shí)，前肢芽器官的發(fā)育和分化受到抑制，并且隨著苯濃度的增加，肢體中各軟骨的發(fā)育分化越差，Neu