GABA受體活化增強(qiáng)nNOS磷酸化抑制缺血性腦損傷的研究.pdf

1、目的: 興奮性神經(jīng)遞質(zhì)和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的平衡維持著大腦正常的生理功能，腦缺血誘導(dǎo)的興奮性的增強(qiáng)和抑制性的減弱是打破這種平衡的原因之一。過(guò)去研究較多的是腦缺血時(shí)NMDA受體介導(dǎo)的谷氨酸興奮毒促進(jìn)了海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的死亡，而對(duì)于GABA受體被激活后在腦缺血性損傷中的作用機(jī)制仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)主要探討在腦缺血性損傷時(shí)增強(qiáng)GABA受體的活化對(duì)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的作用和對(duì)NMDA受體介導(dǎo)的神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)產(chǎn)生的一氧化氮(NO)的影響

2、及可能的分子作用機(jī)制。 方法: 采用四動(dòng)脈結(jié)扎法制作成年SD雄性大鼠全腦缺血模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血/再灌組、溶劑對(duì)照組和給藥組，并用免疫沉淀、免疫印跡、焦油紫染色、免疫組化、TUNEL染色等技術(shù)觀察相應(yīng)指標(biāo)的變化。 結(jié)果: 1.焦油紫染色發(fā)現(xiàn)GABAA受體的激動(dòng)劑蠅蕈醇和GABAB受體的激動(dòng)劑氯苯氨丁酸對(duì)缺血海馬CA1區(qū)神經(jīng)元有保護(hù)作用，而二者聯(lián)合用藥保護(hù)作用更強(qiáng)。 2.聯(lián)合給予蠅蕈醇和氯苯

3、氨丁酸后，在缺血復(fù)灌6小時(shí)或1天能增強(qiáng)nNOS(Ser847)的磷酸化和nNOS與PSD95的結(jié)合。 3.NMDAR的抑制劑MK801增強(qiáng)了缺血復(fù)灌6小時(shí)或1天時(shí)的nNOS(Ser847)的磷酸化和nNOS與PSD95的結(jié)合。 4.在缺血復(fù)灌1天時(shí)，蛋白磷酸酶CaN和PP1/PP2A的抑制劑(FK506和OA)增強(qiáng)了nNOS(Ser847)的磷酸化和nNOS與PSD95的結(jié)合。 5.p-nNOS(Ser847)6

4、小時(shí)和1天的免疫組化結(jié)果表明海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的免疫反應(yīng)性的改變同免疫印跡結(jié)果中nNOS(Ser847)的磷酸化的變化一致。 6.給予MK801、FK506和OA后，焦油紫染色結(jié)果表明給藥組明顯挽救了海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的缺失和死亡；TUNEL染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)給藥組的海馬CA1區(qū)凋亡細(xì)胞明顯減少。 結(jié)論: 在全腦缺血復(fù)灌模型中，GABAA、GABAB受體共活化對(duì)缺血后神經(jīng)元有保護(hù)作用。GABA受體激動(dòng)劑通過(guò)促進(jìn)nNOS與PSD