人源臍血CD34+HSCs的分離和臍帶hUC-MSCs的生物學(xué)特性研究.pdf

1、一、目的
　　1.建立從人臍帶中分離間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。
　　2.培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,研究其相關(guān)生物學(xué)特性。
　　3.建立從臍帶血中分離造血干細(xì)胞的方法。
　　二、方法
　　1.用滅菌瓶采集新生兒臍帶,采用組織塊分離培養(yǎng)法分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　2.取第3-5代細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)生物學(xué)特性分析:生長(zhǎng)曲線分析;細(xì)胞周期;流式鑒定細(xì)胞表面標(biāo)記;成骨,成脂誘導(dǎo)。
　　3.無(wú)菌采集新生兒臍帶血;采用免疫

2、磁珠吸附法從臍帶血中分離造血干細(xì)胞。
　　三、結(jié)果
　　1.成功分離出呈典型梭形纖維狀生長(zhǎng),生長(zhǎng)集落后成旋渦狀的間充質(zhì)干細(xì)胞;
　　2.細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖示,說(shuō)明細(xì)胞生長(zhǎng)速度快,增殖能力強(qiáng),符合間充質(zhì)干細(xì)胞增長(zhǎng)特點(diǎn);
　　3.周期檢測(cè)表明分離的間充質(zhì)干細(xì)胞處于G0/G1期的細(xì)胞占93.29％,處于G2/M期的細(xì)胞占5.26%,S期細(xì)胞占1.45%;說(shuō)明大多數(shù)細(xì)胞處于靜息期,保留了自我更新和分離能力,符合干細(xì)胞特性;<

3、br>　　4.流式檢測(cè)細(xì)胞表面抗原標(biāo)志物,CD29、CD105強(qiáng)表達(dá);陰性表達(dá)CD34、HLA-DR;
　　5.獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)后,被茜素紅染色,顯示有鈣結(jié)節(jié)形成;成脂誘導(dǎo)后,油紅O染色,顯示有脂肪滴形成,說(shuō)明成骨成脂誘導(dǎo)成功;
　　6.流式細(xì)胞儀檢測(cè)免疫磁珠過(guò)磁架分離臍血中CD34造血干細(xì)胞占88.3%,未過(guò)磁架分離的占2.6%;
　　四、結(jié)論
　　本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)無(wú)菌組織塊分離法分離出的細(xì)胞,以細(xì)胞形態(tài)