對(duì)TGF-β不敏感腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)及其在前列腺癌免疫治療中的應(yīng)用.pdf

1、目的：腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)是體內(nèi)抗腫瘤免疫最為有效的效應(yīng)細(xì)胞，但其激活需要抗原呈遞細(xì)胞(APC)處理并呈遞相應(yīng)的抗原。樹突狀細(xì)胞(DC)是目前已知功能最強(qiáng)的APC，可以激活初始T細(xì)胞和記憶性T細(xì)胞。DC可提供T細(xì)胞活化所需的共刺激信號(hào)，在體內(nèi)外誘導(dǎo)CTL的生成。腫瘤組織勻漿、細(xì)胞裂解物包含全部抗原信息，用其致敏DC細(xì)胞，體外可以激發(fā)T細(xì)胞大量增殖，產(chǎn)生腫瘤特異性CTL。轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)是腫瘤細(xì)胞分泌的功能最

2、強(qiáng)的免疫抑制因子。TGF-β具有通過抑制腫瘤抗原呈遞、淋巴細(xì)胞的殺傷作用等多種途徑，負(fù)性調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答和促進(jìn)腫瘤生長的作用。我們通過用攜帶顯性負(fù)相的TGF-βII型受體基因的慢病毒載體感染人CTL，使其對(duì)TGF-β不敏感，為晚期前列腺癌的治療探索一條新的治療途徑。 方法：用同一患者來源的DC、腫瘤組織勻漿、T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)出腫瘤特異性CTL，然后以慢病毒為載體將TβRII-DNglytk基因轉(zhuǎn)染到腫瘤特異性CTL，從而去

3、除了TGF-β對(duì)腫瘤特異性CTL的抑制作用。我們先用PC-3腫瘤細(xì)胞裂解物致敏健康人來源DC，體外刺激T淋巴細(xì)胞，獲得對(duì)TGF-β不敏感腫瘤特異性CTL，并且通過流式細(xì)胞術(shù)，熒光抗體染色，Western-blot，MTT等方法對(duì)其進(jìn)行了分析、鑒定。在此基礎(chǔ)之上，我們將前列腺根治性切除術(shù)后標(biāo)本移植到裸鼠身上，進(jìn)行擴(kuò)增，獲得足量的腫瘤組織，用腫瘤組織勻漿作用于同一患者來源DC，然后刺激T淋巴細(xì)胞，成功獲得了對(duì)TGF-β不敏感腫瘤特異性CTL

4、，并經(jīng)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了對(duì)TGF-β不敏感腫瘤特異性CTL的有效性。 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)采用人重組IL-4、人重組GM-CSF、PC-3腫瘤細(xì)胞裂解物體外誘導(dǎo)PBMC成功培養(yǎng)出負(fù)載腫瘤抗原的DC細(xì)胞，以此致敏T淋巴細(xì)胞，獲得腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞；成功將TβRIIDNglytk基因轉(zhuǎn)入腫瘤特異性CTL細(xì)胞，并獲得鑒定；轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞狀態(tài)、活性影響很??；體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后一定程度上去除了TGF-β對(duì)CTL殺傷腫瘤細(xì)胞的抑制。