應(yīng)用飛行質(zhì)譜技術(shù)從血清中篩選腸癌標(biāo)志蛋白.pdf

1、隨著蛋白組學(xué)的提出和人類DNA框架基本完成，生命科學(xué)進(jìn)入了后基因時(shí)代。研究目標(biāo)從單個(gè)基因轉(zhuǎn)向一群基因(基因組)和功能基因，從遺傳信息轉(zhuǎn)向生物功能，開始從整體組織和細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)角度研究生命活動(dòng)的基本規(guī)律?；蚪M序列翻譯為相應(yīng)功能蛋白，使生物學(xué)功能得以實(shí)現(xiàn)。但二維的基因組學(xué)難以充分預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)及其動(dòng)力學(xué)，基因本身有多態(tài)性，使基因有多種表型，給單純基因診斷帶來(lái)了不確定因素。要徹底了解生命本質(zhì)，必須了解蛋白質(zhì)在生命現(xiàn)象中的作用和相應(yīng)的

2、機(jī)制。蛋白結(jié)構(gòu)或量的變化導(dǎo)致了疾病的發(fā)生。機(jī)體內(nèi)絕大多數(shù)調(diào)控過(guò)程、疾病的發(fā)生機(jī)制、藥物的靶標(biāo)均發(fā)生在蛋白水平。有人認(rèn)為，后基因組學(xué)，特別是蛋白組學(xué)將成為21世紀(jì)生命科學(xué)研究最重要的內(nèi)容。就臨床角度而言，蛋白組學(xué)更具有應(yīng)用價(jià)值。實(shí)際應(yīng)用表明，對(duì)如癌癥、心血管病這些多基因疾病，基因診斷陽(yáng)性率遠(yuǎn)低于單基因遺傳性疾病。比較疾病組織和正常組織的蛋白組的差異往往能鑒別出特定疾病對(duì)應(yīng)的特異蛋白，使之成為疾病的標(biāo)記或藥物的靶分子?，F(xiàn)有的蛋白質(zhì)分析方法只

3、能檢測(cè)1000余種蛋白，按現(xiàn)有技術(shù)，大量的可能攜帶疾病信息的蛋白無(wú)法檢出。實(shí)際上，有效的單一蛋白質(zhì)標(biāo)志極少，許多重要的疾病由于缺乏好的標(biāo)志導(dǎo)致診斷不精確或診斷不及時(shí)。許多學(xué)者深信，如果能根據(jù)一組蛋白質(zhì)的變化來(lái)判斷疾病，預(yù)測(cè)和診斷疾病的準(zhǔn)確性將大大提高。檢測(cè)疾病的蛋白組學(xué)變化將比當(dāng)前常規(guī)檢測(cè)、基因檢測(cè)更準(zhǔn)確、有效。許多疾病將出現(xiàn)新的診斷指標(biāo)，大大改變當(dāng)前診斷學(xué)的落后狀態(tài)。亞利桑那大學(xué)癌癥中心主任Daniel D．Von Hoff認(rèn)為，應(yīng)用

4、SELDI-TOF測(cè)定蛋白組學(xué)最有價(jià)值，血清蛋白組學(xué)圖譜的應(yīng)用，將為腫瘤學(xué)的理論和實(shí)際工作帶來(lái)重大影響，在很大程度上改變腫瘤的治療和預(yù)防措施。 SELDI-TOF-MS是一種應(yīng)用特殊的增強(qiáng)表面芯片結(jié)合激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜分析樣品中蛋白質(zhì)的技術(shù)，具有微量、快速、高通量等特點(diǎn)，尤其適于分析低分子量、低豐度的蛋白質(zhì)。2002年日本田中耕一因發(fā)明該技術(shù)而獲取諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，SELDI技術(shù)發(fā)展十分迅速。本研究是利用SELDI-TOF-

5、MS技術(shù)分析腸癌患者與正常人血清中蛋白質(zhì)成分的變化，以獲得用于腸癌診斷的特異性相關(guān)蛋白。 材料與方法： 用美國(guó)Ciphergen Biosystems公司金屬螯合表面芯片IMAC-Cu和蛋白芯片儀，檢測(cè)結(jié)直腸癌患者和正常人血清蛋白質(zhì)的相對(duì)含量，應(yīng)用Biomarker Wizard軟件分析腸癌組與對(duì)照組間相同質(zhì)荷比的蛋白質(zhì)峰值表達(dá)差異的P值，篩選可用于結(jié)直腸癌早期診斷的血清蛋白質(zhì)特異性生物標(biāo)志物。 結(jié)果：