應(yīng)用飛行質(zhì)譜技術(shù)從血清中篩選腸癌標(biāo)志蛋白.pdf

1、隨著蛋白組學(xué)的提出和人類DNA框架基本完成，生命科學(xué)進(jìn)入了后基因時代。研究目標(biāo)從單個基因轉(zhuǎn)向一群基因(基因組)和功能基因，從遺傳信息轉(zhuǎn)向生物功能，開始從整體組織和細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)角度研究生命活動的基本規(guī)律?；蚪M序列翻譯為相應(yīng)功能蛋白，使生物學(xué)功能得以實現(xiàn)。但二維的基因組學(xué)難以充分預(yù)測蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)及其動力學(xué)，基因本身有多態(tài)性，使基因有多種表型，給單純基因診斷帶來了不確定因素。要徹底了解生命本質(zhì)，必須了解蛋白質(zhì)在生命現(xiàn)象中的作用和相應(yīng)的

2、機(jī)制。蛋白結(jié)構(gòu)或量的變化導(dǎo)致了疾病的發(fā)生。機(jī)體內(nèi)絕大多數(shù)調(diào)控過程、疾病的發(fā)生機(jī)制、藥物的靶標(biāo)均發(fā)生在蛋白水平。有人認(rèn)為，后基因組學(xué)，特別是蛋白組學(xué)將成為21世紀(jì)生命科學(xué)研究最重要的內(nèi)容。就臨床角度而言，蛋白組學(xué)更具有應(yīng)用價值。實際應(yīng)用表明，對如癌癥、心血管病這些多基因疾病，基因診斷陽性率遠(yuǎn)低于單基因遺傳性疾病。比較疾病組織和正常組織的蛋白組的差異往往能鑒別出特定疾病對應(yīng)的特異蛋白，使之成為疾病的標(biāo)記或藥物的靶分子。現(xiàn)有的蛋白質(zhì)分析方法只

3、能檢測1000余種蛋白，按現(xiàn)有技術(shù)，大量的可能攜帶疾病信息的蛋白無法檢出。實際上，有效的單一蛋白質(zhì)標(biāo)志極少，許多重要的疾病由于缺乏好的標(biāo)志導(dǎo)致診斷不精確或診斷不及時。許多學(xué)者深信，如果能根據(jù)一組蛋白質(zhì)的變化來判斷疾病，預(yù)測和診斷疾病的準(zhǔn)確性將大大提高。檢測疾病的蛋白組學(xué)變化將比當(dāng)前常規(guī)檢測、基因檢測更準(zhǔn)確、有效。許多疾病將出現(xiàn)新的診斷指標(biāo)，大大改變當(dāng)前診斷學(xué)的落后狀態(tài)。亞利桑那大學(xué)癌癥中心主任Daniel D．Von Hoff認(rèn)為，應(yīng)用

4、SELDI-TOF測定蛋白組學(xué)最有價值，血清蛋白組學(xué)圖譜的應(yīng)用，將為腫瘤學(xué)的理論和實際工作帶來重大影響，在很大程度上改變腫瘤的治療和預(yù)防措施。 SELDI-TOF-MS是一種應(yīng)用特殊的增強(qiáng)表面芯片結(jié)合激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜分析樣品中蛋白質(zhì)的技術(shù)，具有微量、快速、高通量等特點，尤其適于分析低分子量、低豐度的蛋白質(zhì)。2002年日本田中耕一因發(fā)明該技術(shù)而獲取諾貝爾化學(xué)獎，SELDI技術(shù)發(fā)展十分迅速。本研究是利用SELDI-TOF-

5、MS技術(shù)分析腸癌患者與正常人血清中蛋白質(zhì)成分的變化，以獲得用于腸癌診斷的特異性相關(guān)蛋白。 材料與方法： 用美國Ciphergen Biosystems公司金屬螯合表面芯片IMAC-Cu和蛋白芯片儀，檢測結(jié)直腸癌患者和正常人血清蛋白質(zhì)的相對含量，應(yīng)用Biomarker Wizard軟件分析腸癌組與對照組間相同質(zhì)荷比的蛋白質(zhì)峰值表達(dá)差異的P值，篩選可用于結(jié)直腸癌早期診斷的血清蛋白質(zhì)特異性生物標(biāo)志物。 結(jié)果：