慢病毒載體介導(dǎo)的鼠基因工程Treg對GVHD的作用研究.pdf

1、目的: 以自身失活型慢病毒為載體，制備鼠基因工程調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg），通過體外實驗，鑒定其表型、增殖能力及免疫抑制能力；通過小鼠allo-BMT模型，探索聯(lián)合輸注的基因工程Treg對急性GVHD的防治作用。
　　 方法: 構(gòu)建含鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒載體。包裝病毒后感染免疫磁珠分離的小鼠CD4+CD25-T細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、CCK-8法、ELISA法檢測細(xì)胞表型及功能變化。構(gòu)建小鼠allo-BMT模

2、型，聯(lián)合輸注基因工程Treg，通過受鼠GVHD臨床積分、組織病理學(xué)改變等評價其防治急性GVHD的作用。
　　 結(jié)果: 成功構(gòu)建了慢病毒表達(dá)質(zhì)粒pXZ208-Foxp3-IRES-GFP。病毒感染CD4+CD25-T細(xì)胞后，后者Foxp3、CD25、CTLA-4、GITR表達(dá)升高，并且具有低增殖能力及免疫抑制性。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示，小鼠allo-BMT聯(lián)合輸注基因工程Treg后，受鼠生存率顯著提高，長期存活小鼠無或僅有輕度GVHD臨