急性髓系白血病的染色體和FISH研究.pdf

1、急性髓系白血病(acute myeoid leukemia，AML)是起源于造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病。染色體核型異常不但對(duì)于AML的診斷分型，而且對(duì)于其預(yù)后的判斷和制定合適的治療方案均有重要意義，目前，采用常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)( conventionalcytogenetics，CC)成人AML的核型異常檢出率約為54％-78％，仍有45％左右的AML顯示正常核型。這些具有正常核型的AML對(duì)治療的反應(yīng)和生存期依然具有很大的異質(zhì)性。此外A

2、ML中10％-12％的復(fù)雜染色體核型單靠CC尚不能闡明其異常的性質(zhì)，近年來，許多學(xué)者應(yīng)用新的分子遺傳學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，揭示了CC未檢出的隱匿異常，闡明了復(fù)雜異常的性質(zhì)。本文對(duì)330例連續(xù)AML作了細(xì)胞遺傳學(xué)和分子細(xì)胞遺傳學(xué)的研究，其中320例染色體檢查獲得成功，包括317例原發(fā)性AML和3例繼發(fā)性AML。 目的:分析我國(guó)317例原發(fā)性急性髓系白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)特點(diǎn)；應(yīng)用間期FISH技術(shù)檢測(cè)隱匿的特異性染色體重排；評(píng)價(jià)新的分子遺

3、傳學(xué)技術(shù)M-FISH對(duì)闡明復(fù)雜核型異常性質(zhì)的價(jià)值。 方法:所有患者均采用骨髓細(xì)胞直接法和/或短期培養(yǎng)法制備染色體，采用R顯帶技術(shù)進(jìn)行核型分析。應(yīng)用MLL、CBFβ/MYH11、AML1/ETO、PML/RARα一系列FISH探針分別對(duì)FAB亞型為M5、M4、M2、M3而CC分析未發(fā)現(xiàn)典型的相關(guān)易位的病例和伴三體22異常的AML進(jìn)行FISH檢測(cè)；應(yīng)用M-FISH、染色體涂染和間期FISH對(duì)伴有復(fù)雜核型異常的AML進(jìn)行分析。

4、 結(jié)果: 1、CC分析揭示175例有克隆性核型異常，142例為正常核型，異常核型檢出率為55％。結(jié)構(gòu)異常中以特異性染色體易位最為多見，共有103例，占異常核型總數(shù)的59％。其中t(15；17)55例，為最多見的易位，均見于M3亞型，其中位白細(xì)胞數(shù)較低，CD34和HLA-DR抗原低表達(dá)或不表達(dá)，完全緩解(CR)率最高，和正常核型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其次是t(8；21)，見于40例，其中80％為M2亞型，占M2亞型總數(shù)的32.7

5、％，其中位白細(xì)胞數(shù)較正常核型組低，除髓系抗原外常表達(dá)CD19，其CR率92％高于復(fù)雜核型組；inv(16)3例，分別見于M2、M4EO和M5型，CR率達(dá)100％；11q23重排5例，其中4例為t(9；11)，均為M5型，另1例為t(11；19)，見于M2型；t(9；22)僅2例，分別見于M5和M6亞型。復(fù)雜異常22例，主要見于M5和M6型(各5例)，其CR率最低，為38％，11例已死亡，中位生存期僅5個(gè)月。t(8；21)組、t(15；1

6、7)組和正常核型組的生存率均高于復(fù)雜異常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、應(yīng)用AML/ETO探針對(duì)38例M2-AML進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中4例t(8；21)陽性：包括2例典型信號(hào)模式，2例插入易位；應(yīng)用PML/RARα探針對(duì)9例CC未見t(15；17)的M3-AML進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果其中6例顯示陽性：其中2例為典型陽性信號(hào)模式，3例為插入易位所致，1例FISH及多重RT-PCR檢測(cè)未見PML/RARα，應(yīng)用RARα探針檢測(cè)顯示RARA基因部分

7、缺失；應(yīng)用CBFβ斷裂點(diǎn)分開的雙色FISH探針對(duì)23例CC分析未見典型inv(16)的M4(包含M4EO)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中3例陽性(均為典型信號(hào))；應(yīng)用MLL探針對(duì)38例CC分析未見11q23重排的M5進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。19例+22AML中FISH檢測(cè)發(fā)現(xiàn)13(68.4％)例為CBFβ重排陽性，包括M4E07例，M53例，M2a2例，M11例：14例的隨訪資料顯示CBFβ重排陽性的11例中10例尚存活，僅1例死亡，而CBFβ

8、重排陰性的3例均已死亡。 3、317例原發(fā)性AML中CC分析共檢出22例復(fù)雜核型異常，占異常核型總數(shù)的12.5％。其中3例只有數(shù)目異常，2例只有結(jié)構(gòu)異常，17例為數(shù)目合并結(jié)構(gòu)異常。具體異常類型包括染色體增加19種，最常見的為+8，見于8例次；染色體丟失15種，其中-5、-7和-19最多見，各見于4例次，結(jié)構(gòu)異常86種，包括5種平衡易位，23種來源不明的標(biāo)記染色體，2種環(huán)狀染色體，5種衍生染色體，27種染色體部分缺失和24種不明來

9、源的額外物質(zhì)。M-FISH對(duì)其中10例和1例MPD轉(zhuǎn)化而來的AML進(jìn)行分析除證實(shí)CC發(fā)現(xiàn)的異常外，還探明6種標(biāo)記染色體的來源，查明2種衍生染色體的性質(zhì)，檢出8種新的衍生染色體。后者均系不平衡易位所致，其中不少被CC誤認(rèn)為染色體部分缺失、不明來源的額外物質(zhì)、染色體單體和標(biāo)記染色體等。染色體涂染證實(shí)了多數(shù)M-FISH的發(fā)現(xiàn)。 結(jié)論: 1、本組原發(fā)性AML的異常核型檢出率為55％，其中特異性染色體易位占59％，仍有45％的病例

10、顯示正常核型。 2、本研究證實(shí)染色體核型有重要的預(yù)后價(jià)值：t(8；21)和t(15；17) AML預(yù)后較好，復(fù)雜核型異常AML預(yù)后最差。 3、應(yīng)用染色體易位探針進(jìn)行間期FISH檢測(cè)確實(shí)可在少數(shù)伴有正常核型或伴特異性染色體易位的其它異常AML中檢出隱匿性重排，例如AML/ETO，PML/RARα和CBFp/MYH11，但對(duì)于檢出MLL重排似無幫助。 4、三體22有預(yù)測(cè)inv(16)的作用。 5、M-FISH