玻璃化法低溫保存臍血造血干細(xì)胞的研究.pdf

1、臍血中含有豐富的造血干細(xì)胞，是繼骨髓和外周血之后新近發(fā)現(xiàn)的造血干細(xì)胞的又一來(lái)源。為了更有效地利用臍血造血干細(xì)胞，臍血造血干細(xì)胞的低溫保存便成為一個(gè)重要的課題。目前，臍血造血干細(xì)胞的低溫保存主要采用的是慢速凍存方法，但是這種方法的凍存效果以及凍存技術(shù)還有需要提高和完善的地方；玻璃化法作為一種新型的、簡(jiǎn)便的低溫保存方法可以有效地克服慢速凍存的缺點(diǎn)，但是玻璃化法需要高濃度的保護(hù)劑才能實(shí)現(xiàn)，這會(huì)給細(xì)胞帶來(lái)很大的滲透損傷和毒性損傷。本文對(duì)聯(lián)合玻璃

2、化保護(hù)劑的特性，聯(lián)合玻璃化保護(hù)劑的導(dǎo)入、洗脫程序以及臍血造血干細(xì)胞玻璃化低溫保存過(guò)程等方面的問(wèn)題進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。 首先對(duì)聯(lián)合玻璃化保護(hù)劑的特性進(jìn)行了研究。聯(lián)合玻璃化保護(hù)劑的組成為：25％DMSO、17％甲酰胺、10％1，2-丙二醇和6％聚乙二醇(w/v)。通過(guò)稀釋的方法測(cè)定了不同濃度的聯(lián)合玻璃化保護(hù)劑的滲透壓值。通過(guò)冷臺(tái)觀察發(fā)現(xiàn)當(dāng)降溫速率低于30℃/min時(shí)，保護(hù)劑不能實(shí)現(xiàn)玻璃化。提高復(fù)溫速率能夠有效地減少反玻璃化過(guò)程中冰

3、晶的數(shù)量，抑制冰晶的生長(zhǎng)。同時(shí)經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定，采用一步導(dǎo)入方法進(jìn)行保護(hù)劑導(dǎo)入時(shí)會(huì)對(duì)造血干細(xì)胞造成嚴(yán)重的滲透損傷和毒性損傷。 其次對(duì)臍血造血干細(xì)胞聯(lián)合玻璃化保護(hù)劑的導(dǎo)入洗脫過(guò)程進(jìn)行了優(yōu)化。通過(guò)采用分五步、不同平衡時(shí)間的方法對(duì)導(dǎo)入洗脫過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)考察在洗脫過(guò)程中添加不同濃度的海藻糖對(duì)洗脫效果的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：五步導(dǎo)入每步之間平衡90s和五步洗脫每步之間平衡60s得到了最佳的造血干細(xì)胞活率。在洗脫過(guò)程中添加0.5M海藻糖能夠有效