c-FLIP(L)在乳腺癌中的表達及對TRAIL通路調(diào)節(jié)作用的初步探討.pdf

1、天津醫(yī)科大學博士學位論文cFLIP（L）在乳腺癌中的表達及對TRAIL通路調(diào)節(jié)作用的初步探討姓名：臧鳳琳申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：孫保存20090501天津醫(yī)科大學博士學位論文研究結(jié)果1cFLIP(L)蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中呈低～中等程度表達(陽性率為3636％)，在癌旁乳腺組織中呈高表達(陽性率為75％)；其中強陽性染色病例在乳腺癌組織中占1429％，在癌旁乳腺組織中占5758％；兩組比較有顯著性差別(氏O01)。

2、統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，cFLIP(L)蛋白高表達與患者年齡(35歲)、絕經(jīng)前、未發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移、較早的pTNM分期(III期)密切相關(guān)以及ER、PR蛋白的表達水平相關(guān)(Po05)。2在體外培養(yǎng)的不同乳腺癌細胞系中，均可檢NNcFLIP(L)mRNA和蛋白的表達，但cFLIP(L)在不同的細胞間存在表達差異。TRAIL通路受體DR4、DR5在不同的乳腺癌細胞中表達水平不同，相對于每一株細胞來說，二者的陽性率呈現(xiàn)一致性。3免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，cFL

3、IP(L)蛋白的表達與DR4受體的表達呈正相關(guān)，二者之間關(guān)系有統(tǒng)計學意義(rs=0452，P=0035)；對于DR5受體，雖然呈現(xiàn)出cFLIP(L蛋白表達越高，DtL5受體表達越高的趨勢，但二者之間無明顯相關(guān)性(rs=O419，P0066)。此外，cFLIP(L)蛋白的表達與凋亡指數(shù)正相關(guān)(rs=0554，P=0005)；該蛋白表達升高增殖指數(shù)有所下降，但二者之間無顯著相關(guān)性。4轉(zhuǎn)染特異性表達質(zhì)粒發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染后24h，cFLIP(L)mR

4、NA和蛋白含量出現(xiàn)升高；轉(zhuǎn)染后48h和72hmRNA含量仍能維持較高水平，蛋白的表達量有所下降。在此基礎(chǔ)上，TRAIL誘導細胞4h，抑制率出現(xiàn)變化，隨時間延長呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢，其中處理24h可達到較高水平；每個觀察時間點下TRAIL濃度為10ng／ml時的抑制率均較高，隨濃度加大仍能維持。5TRAIL誘導后，在高表達cFLIP(L)的MDAMB231細胞中，凋亡細胞比例可升至5165％；經(jīng)電泳分析，其DNA斷裂呈規(guī)律的階梯狀；此時大部

5、分細胞失去原有形態(tài)，胞體圓縮，間隙增大，折光性減弱，分裂像少見。6應用TRAIL誘導凋亡后，在高表達cFLIP(L)的MDAMB231細胞中，caspase一8活性提升5倍，caspase3活性提升3倍，caspase9、caspase2活性變化不明顯。7與轉(zhuǎn)染空載體細胞相比，TRAIL可誘導cFLIP(L)高表達細胞內(nèi)的caspase8蛋白發(fā)生酶切降解，全長的p55caspase8含量減少，胞漿中出現(xiàn)p43、p18和p10亞片段；同時