CHD1L在乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：乳腺癌是女性癌癥相關(guān)死亡的首要原因。乳腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是引起乳腺癌患者死亡的主要原因，其侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制非常復(fù)雜。類(lèi)似 DNA結(jié)合蛋白1的染色質(zhì)解旋酶（chromodomain helicase/ATP DNA binding protein1-like gene，CHD1L），又稱(chēng)為ALC1（amplifiedin liver cancer1）是新近發(fā)現(xiàn)的癌基因，可出現(xiàn)在多種實(shí)體瘤中。先前研究表明 CHD1L與肝癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)

2、移有著密切的關(guān)系，而且其與食管癌、卵巢癌、結(jié)腸癌及膀胱癌的發(fā)生也有一定的關(guān)系。但是，CHD1L在乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移方面的研究目前尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究將在手術(shù)切除乳腺癌組織、細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等三個(gè)方面研究 CHD1L在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中所起的作用及影響乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，為臨床治療乳腺癌提供新的途徑、靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)乳腺癌標(biāo)本中 CHD1L的表達(dá)，并分析其表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

3、應(yīng)用Western blot及熒光定量PCR（Real-time PCR，qRT-PCR）檢測(cè)人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF10A及乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、T47D、SK-BR-7、MDA-MB-231中CHD1L蛋白及mRNA的表達(dá)情況；用RNA干擾技術(shù)敲除MDA-MB-231細(xì)胞中的CHD1L，用過(guò)表達(dá)載體上調(diào)MCF-7細(xì)胞中的CHD1L，用Western blot及qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中CHD1L蛋白及mRNA的表達(dá)情況；應(yīng)用趨化運(yùn)動(dòng)

4、實(shí)驗(yàn)檢測(cè) CHD1L對(duì)乳腺癌細(xì)胞的趨化運(yùn)動(dòng)能力的影響；通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察CHD1L對(duì)乳腺癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力的影響。應(yīng)用Western blot檢測(cè)CHD1L對(duì)乳腺癌細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2、MMP-9、磷酸化 Akt（p-Akt）/Akt、p-ARK5/ARK5及pmTOR/mTOR的表達(dá)的影響；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzymes linked

5、immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)CHD1L對(duì)乳腺癌細(xì)胞分泌MMP-2、MMP-9表達(dá)的改變。利用裸鼠移植實(shí)驗(yàn)觀察 CHD1L對(duì)乳腺癌細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)的侵襲及轉(zhuǎn)移情況的影響。
　　結(jié)果：CHD1L在乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為41.8％（112/268），明顯高于癌旁相對(duì)正常乳腺組織（P＜0.05）。CHD1L蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.008）、腫瘤分化（P=0.020）、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P=0.026）、MMP-2

6、（P=0.035）及MMP-9(P=0.022)表達(dá)有關(guān)，而與年齡、腫瘤大小、ER、PR及CerbB-2的表達(dá)無(wú)關(guān)（P均＞0.05）。敲除MDA-MB-231細(xì)胞中的CHD1L后，細(xì)胞的趨化運(yùn)動(dòng)能力、細(xì)胞侵襲和遷移能力及MMP-2、MMP-9的表達(dá)均明顯降低，而過(guò)表達(dá)MCF-7細(xì)胞中CHD1L以后，細(xì)胞的趨化運(yùn)動(dòng)能力、細(xì)胞侵襲和遷移能力及MMP-2、MMP-9的表達(dá)均明顯升高。敲除CHD1L以后抑制了EGF誘導(dǎo)的Akt、ARK5及mTO