聚乙烯亞胺抑制脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞TNF-α的表達(dá).pdf

1、背景：膿毒癥是感染引起的全身性炎癥反應(yīng)綜合征，目前雖然對(duì)膿毒癥的診斷和治療有了很大的進(jìn)展，但其發(fā)病率和病死率仍然居高不下。革蘭氏陰性菌是引起膿毒癥的主要致病菌。脂多糖位于革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的外層，是其主要的致病成分。為了進(jìn)一步探討脂多糖的作用機(jī)制并找出潛在的治療靶目標(biāo)，我們研究了脂多糖的分子結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)其是富含陰離子的大分子物質(zhì)，也就是說(shuō)在液體狀態(tài)下脂多糖帶有大量的負(fù)電荷。那么，能否找到一種富含陽(yáng)離子的物質(zhì)，來(lái)中和脂多糖所帶的負(fù)電荷，從而

2、達(dá)到削弱或者抑制脂多糖促炎反應(yīng)的作用呢？由此我們找到了聚乙烯亞胺這種物質(zhì)，聚乙烯亞胺是富含陽(yáng)離子的聚合物，具有高反應(yīng)活性，常用做轉(zhuǎn)染試劑，免疫佐劑，基因疫苗運(yùn)輸工具等。
　　目的：觀察聚乙烯亞胺能否對(duì)脂多糖已經(jīng)引起的炎癥反應(yīng)有一定的抑制作用。
　　方法：用含10％胎牛血清的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞，選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，用10ng/ml LPS刺激RAW264.7模擬炎癥反應(yīng)模型。實(shí)驗(yàn)分為空白組，LPS組，LPS

3、+PEI組，PEI組，LPS+PEI組在10ng/mlLPS刺激RAW264.710min后加入1μg/ml PEI，然后在2h檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)TNF-αmRNA的表達(dá)量，4h檢測(cè)各組上清內(nèi)TNF-α的濃度。用10ng/mlAlexa-LPS標(biāo)記RAW264.7，同時(shí)檢測(cè)應(yīng)用PEI后RAW264.7對(duì)Alexa-LPS的結(jié)合有無(wú)改變。
　　結(jié)果：與空白組相比，LPS組TNF-α在mRNA和蛋白水平表達(dá)均明顯升高。應(yīng)用聚乙烯亞胺處理后