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1、血管重建是高血壓、動脈粥樣硬化等心血管疾病共同的發(fā)病基礎(chǔ)和基本的病理過程。低切應(yīng)力在動脈粥樣硬化血管重建發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,然而其分子機制仍未闡明。開展力學(xué)因素作用條件下的心血管蛋白質(zhì)組研究,尋找力學(xué)因素對心血管作用的藥物靶標(biāo)或生物標(biāo)記物,有助于我們從蛋白質(zhì)水平更全面地了解血管重建的分子機制,為臨床防治心血管疾病提供新的力學(xué)生物學(xué)依據(jù)。 本文應(yīng)用雙向凝膠電泳(2-DE) 結(jié)合質(zhì)譜分析與生物信息學(xué)分析的蛋白質(zhì)組學(xué)方法,比較了正
2、常切應(yīng)力(15 dyn/cm2) 與低切應(yīng)力(5 dyn/cm2) 條件下體外培養(yǎng)的大鼠胸主動脈蛋白表達的差異;同時對蛋白質(zhì)組學(xué)分析篩選出的血管差異表達蛋白Rho-GDIα,應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)和蛋白免疫印跡技術(shù)進行組織水平的驗證;應(yīng)用細胞聯(lián)合培養(yǎng)流動腔系統(tǒng)和蛋白免疫印跡技術(shù),檢測了正常切應(yīng)力與低切應(yīng)力條件下,大鼠血管平滑肌細胞(VSMCs) 與內(nèi)皮細胞(ECs)的Rho-GDIα表達變化。結(jié)果顯示:①2-DE圖譜中,2倍以上差異表達
3、的蛋白點有78個,質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫檢索確定了其中43個蛋白的身份,大多數(shù)差異蛋白的功能涉及細胞骨架、信號傳遞、能量代謝和細胞外基質(zhì)分子等,其中Rho家族磷酸化的調(diào)節(jié)蛋白Rho-GDIα在低切應(yīng)力組低表達;②與正常切應(yīng)力組相比,低切應(yīng)力條件下體外應(yīng)力培養(yǎng)血管組織的Rho-GDIα在RNA和蛋白水平的表達均下降,與蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果一致;③與正常切應(yīng)力組相比,低切應(yīng)力條件下聯(lián)合培養(yǎng)VSMCs與ECs的Rho-GDIα蛋白表達均明顯降低,這一
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