活躍鏈霉菌中耐抗生素的rRNA甲基轉(zhuǎn)移酶NSR的表達(dá)、純化與結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、抗生素是人類抵抗病原微生物感染的重要手段，挽救過無數(shù)人的生命。然而，隨著抗生素的廣泛使用，抗生素的濫用越來越嚴(yán)重，導(dǎo)致微生物的抗藥性問題越來越棘手。于是研究微生物抗藥性的分子機(jī)理就變得極為重要。諾西肽是一種廣泛使用的獸用抗生素，它是利用對其不敏感的微生物活躍鏈霉菌來生產(chǎn)的?；钴S鏈霉菌中有一種抗性基因編碼rRNA甲基轉(zhuǎn)移酶NSR，它能甲基化諾西肽與核糖體50S大亞基上的23SrRNA的結(jié)合處的A1067，從而使諾西肽無法結(jié)合而失效。然而，

2、NSR的晶體結(jié)構(gòu)以及其酶活作用的分子機(jī)理仍然是未知的。
　　我們運(yùn)用基因工程技術(shù)，利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)和純化了NSR，生長出了衍射很好的蛋白晶體，并收集了衍射數(shù)據(jù)和解析了蛋白單體的晶體結(jié)構(gòu)(1.9A)以及SAM共晶的晶體結(jié)構(gòu)(2.25A)。
　　在此基礎(chǔ)上，我們基于結(jié)構(gòu)分析了系統(tǒng)地設(shè)計(jì)了不同的突變體來研究NSR的功能。從晶體結(jié)構(gòu)可以看出，NSR以同源二聚體的形式存在，表明NSR的二聚化對它的甲基轉(zhuǎn)移酶的功能有著重要作用。