二甲雙胍聯(lián)合放療對結直腸癌SW480和HCT116細胞增殖凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：觀察二甲雙胍與放療聯(lián)合應用對人結直腸癌SW480和HCT116細胞的增殖凋亡作用，并探討其可能的相關機制。
　　方法：1、采用cck-8法檢測不同濃度的二甲雙胍、不同劑量的X射線及二甲雙胍聯(lián)合X射線對人結直腸癌細胞增殖的影響。
　　2、應用平板克隆形成實驗和流式細胞術檢測單用二甲雙胍、單用X射線、二甲雙胍聯(lián)合X射線等不同干預后人結直腸癌細胞的生存及凋亡情況。
　　3、運用基因表達譜芯片技術分析人結直腸癌SW480

2、和HC T116細胞在對照組、單用二甲雙胍組、單用X射線組、二甲雙胍聯(lián)合X射線組中基因的表達差異，為后續(xù)的機制研究提供新的線索。
　　4、采用定量PCR驗證基因芯片的分析結果，同時檢測細胞在不同方式處理后，細胞中ADORA1、Caspase3、Caspase9、Bcl-2的mRNA表達情況。
　　5、應用Western Blotting檢測不同方式處理細胞后相關蛋白的表達情況。
　　結果：1、cck-8結果顯示：不同濃

3、度（1、5、10 mmo l/l）二甲雙胍對細胞的增殖有抑制作用，并存在濃度、時間的依賴關系；同時，不同劑量（2、4、6、8、10、12Gy）X射線對細胞也有增殖抑制作用，但在8Gy時對細胞的增殖抑制作用最明顯；在二甲雙胍（1mmol/l）與 X射線（8Gy）聯(lián)合實驗中發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合組對細胞的增殖抑制作用均明顯高于單用組，具有顯著差異（P<0.05）。
　　2、平板克隆形成實驗結果顯示：二甲雙胍和X射線均能抑制細胞的生存能力，二甲雙胍

4、（1mmol/l）與 X射線（8Gy）聯(lián)合后對細胞生存能力的抑制作用明顯高于單用組，具有顯著差異（P<0.05）。
　　3、流式細胞術檢測結果顯示：二甲雙胍（1mmol/l）與X射線（8Gy）聯(lián)合誘導細胞凋亡率明顯高于二者單用時，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4、基因表達譜芯片技術分析結果示：二甲雙胍（1 mmo l/l）處理SW480和HCT116細胞后發(fā)現(xiàn)多個表達差異基因，從中選取一個與凋亡有關且在二甲雙胍抗腫瘤

5、作用中未曾報導的基因腺苷A1受體（Ade nos ine A1 Rec eptor）進行研究。
　　5、定量PCR結果顯示：驗證了基因芯片的結果，在二甲雙胍（1mmol/l）與X射線（8Gy）聯(lián)合組ADORA1、Caspase3、Caspase9的mRNA表達均高于單用組，而Bcl-2的mRNA表達低于單用組，且有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　6、Western blotting結果顯示：與單用二甲雙胍組（1mmol/l

6、）、單用X射線組（8Gy）比較，聯(lián)合組的p-AMPK、ADORA1、Caspase3、Caspase9表達明顯增加，而p-mTOR和Bcl-2的表達明顯下降。
　　結論：1、二甲雙胍與X射線均可抑制人結直腸癌SW480和HCT116細胞增殖及生存能力，但二者聯(lián)合的效應要明顯強于二者單用。
　　2、二甲雙胍與X射線聯(lián)合促進人結直腸癌SW480和HCT116細胞凋亡的效果要明顯強于二者單用時引起的細胞凋亡。
　　3、二甲雙