雞眼草總黃酮干混懸劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、目的：
　　中藥雞眼草為豆科植物雞眼草Kummerowia striata (Thunb.) Schindle.的全草，臨床用于治療嬰幼兒輪狀病毒腸炎及遷延性慢性腹瀉，療效顯著。為提高嬰幼兒用藥量的準(zhǔn)確性、適應(yīng)性，保證用藥安全，本文旨在制備雞眼草總黃酮干混懸劑并對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。
　　主要研究?jī)?nèi)容包括:HPLC法測(cè)定槲皮素、木犀草素、山奈素含量，雞眼草指紋圖譜研究，雞眼草總黃酮提取與富集，雞眼草干混懸劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研

2、究等五方面。
　　方法：
　　一、HPLC法測(cè)定雞眼草中槲皮素、木犀草素、山奈素的含量
　　采用HPLC法同時(shí)測(cè)定雞眼草中槲皮素、木犀草素、山奈素的含量。色譜柱Diamons C18，4.6mm×150mm，5μm;流動(dòng)相甲醇-0.1％磷酸(52∶48);流速1.0mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)360nm。經(jīng)方法學(xué)考察，確定所建立的測(cè)定方法穩(wěn)定可行。測(cè)定了雞眼草不同部位（莖、葉、全草）中三種黃酮的含量，為雞眼草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建

3、立提供科學(xué)依據(jù)。
　　二、雞眼草指紋圖譜研究
　　以10批雞眼草藥材為分析對(duì)象，用HPLC法建立對(duì)其的指紋圖譜研究。在相同色譜條件下，通過保留時(shí)間及紫外吸收色譜圖，對(duì)主要色譜峰進(jìn)行鑒別，經(jīng)方法學(xué)考察，確定的測(cè)定方法穩(wěn)定可行性，采用藥典委員會(huì)推薦的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件(2004A)對(duì)指紋圖譜相似度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　三、雞眼草總黃酮提取與富集
　　以蘆丁為對(duì)照品，經(jīng)過NaNO2-Al(NO3)3顯色系顯色

4、，采用紫外可見分光光度法測(cè)定總黃酮含量，以乙醇單因素考察選取提取最佳乙醇濃度，采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化雞眼草總黃酮的提取工藝，經(jīng)過試驗(yàn)結(jié)果的直觀分析和方差分析，確定提取工藝。以雞眼草總黃酮的吸附量和解吸率為指標(biāo)篩選大孔吸附樹脂，并優(yōu)化純化工藝的條件。
　　四、雞眼草干混懸劑的制備工藝
　　雞眼草干混懸劑的制備工藝:對(duì)雞眼草總黃酮粉末原料藥吸濕性進(jìn)行考察;填充劑、助懸劑等輔料的單因素考察。在單因素考察的基礎(chǔ)上，選取助懸劑，潤(rùn)濕劑、主

5、藥用量三個(gè)主要因素作為考察因素，建立L9(34)正交試驗(yàn)，通過試驗(yàn)結(jié)果直觀分析及方差分析，優(yōu)化處方工藝。
　　五、雞眼草干混懸劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
　　雞眼草干混懸劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):采用薄層色譜法對(duì)干混懸劑中木犀草素、山奈酚進(jìn)行定性鑒別，展開系統(tǒng)采用甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)，日光下及紫外燈(254nm)下觀察。采用HPLC法同時(shí)測(cè)定干混懸劑中木犀草苷、木犀草素的含量。初步建立雞眼草干混懸劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：

6、>　　雞眼草葉中槲皮素、木犀草素、山奈素的含量較全草和莖中含量高，分別為48.83μg/g、432.20μg/g、33.11μg/g，莖中含量最低。
　　指紋圖譜共有峰達(dá)17個(gè)，峰面積和占所有峰面積比大于90％，四強(qiáng)峰3，6，S，14，峰面積和達(dá)70％以上，標(biāo)定了6個(gè)色譜峰包括:蘆丁、木犀草苷、槲皮素、木犀草素、染料木素、山奈酚。10批藥材的相似度分別0.9731、0.9618、0.9522、0.9879、0.9411、0.941

7、7、0.9276、0.9443、0.9524、0.9720。
　　雞眼草總黃酮提取工藝為12倍量50％乙醇，加熱回流提取3次，每次2h。富集工藝選用D-101大孔吸附樹脂，最大吸附量為52.74mg/g，洗脫劑的選擇為:吸附飽和后先用10％乙醇快速洗脫至洗脫液幾乎無色，然后用5BV70％乙醇洗脫，干膏中總黃酮含量達(dá)71.46％，有效部位大于50％，達(dá)到中藥有效部位新藥的技術(shù)要求。
　　雞眼草干混懸劑優(yōu)化處方為海藻酸鈉12％，

8、十二烷基硫酸鈉5％，主藥粉末6％，橘子香精，微粉硅膠少許，乳糖補(bǔ)足處方量。制備工藝如下:
　　(1)取干燥的雞眼草總黃酮粉碎，過120目篩，備用。
　　(2)取干燥的海藻酸鈉、十二烷基硫酸鈉、乳糖，橘子香精和微粉硅膠粉碎過100目篩，備用。
　　(3)以等量遞增法，按處方量依次將(1)、(2)項(xiàng)下混勻，即得。
　　(4)以上操作環(huán)境相對(duì)濕度應(yīng)小于42％。
　　薄層鑒定可見木犀草素、山奈酚斑點(diǎn)清晰，大小適中，

9、無拖尾且Rf值適中。HPLC法暫定混合粉中木犀草苷的含量不得低于0.12％，木犀草素含量不低于0.17％。以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外分光光度法檢測(cè)，總黃酮含量不低于50％。
　　結(jié)論：
　　采用高效液相色譜法對(duì)雞眼草中槲皮素、木犀草素、山奈酚三種化合物的含量進(jìn)行了測(cè)定，為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供科學(xué)依據(jù);
　　建立雞眼草藥材的中藥指紋圖譜，為雞眼草藥材的真?zhèn)舞b別、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供依據(jù);
　　本文對(duì)雞眼草提取工藝、富集工