聚陽離子材料在腫瘤基因治療及協(xié)同藥物逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的研究.pdf

1、本論文對聚陽離子載體在基因運輸和解決多藥耐藥問題方面的應(yīng)用作了研究，主要分為以下三方面:
　　1)成功合成了一種類PEI聚天冬酰胺氨基衍生物PEE，通過氫譜核磁共振對合成的PEE進行結(jié)構(gòu)的確認(rèn)，形態(tài)學(xué)表征證實了PEE能與質(zhì)粒DNA形成均勻的球狀復(fù)合物，易于細(xì)胞攝取。通過體外細(xì)胞實驗研究了細(xì)胞攝取過程、細(xì)胞毒性和基因表達效率等，說明PEE在體外具有類PEI的細(xì)胞毒性和基因表達能力。通過小鼠和異體荷B16BL6瘤的裸鼠研究了PEE的體

2、內(nèi)毒性和轉(zhuǎn)染效率，血象和H/E染色切片表明PEE對心臟、肝臟、腎臟這些主要器官均無毒性，活體熒光成像和冰凍切片實驗說明其體內(nèi)的轉(zhuǎn)染效率與PEI類似。從體內(nèi)外水平證明了PEE是一種功能上與PEI類似的低體內(nèi)毒性的聚天冬酰胺氨基衍生物基因載體。
　　2)成功合成了一種能攜帶藥物和基因自組裝形成膠束的聚乙烯亞胺-環(huán)糊精-膽固醇兩親性聚陽離子高分子PCC。對不同膽固醇接枝率的PCC進行了理化性質(zhì)、細(xì)胞毒性、載基因和載藥能力的研究，發(fā)現(xiàn)外層

3、陽離子與基因的相互作用和壓縮會導(dǎo)致疏水內(nèi)核中的藥物釋放減緩。將靶向MDR1的siRNA和DOX聯(lián)用，利用siRNA把P-gp沉默，然后緩釋的DOX被耐藥細(xì)胞泵出量減少，細(xì)胞內(nèi)濃度增加，使DOX在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮藥效，最終達到逆轉(zhuǎn)耐藥的目的。DOX細(xì)胞內(nèi)富集實驗證明了在siRNA的存在下，DOX在細(xì)胞內(nèi)濃度增加并能長時間在細(xì)胞內(nèi)停留。Western Blotting實驗和RT-PCR實驗證明了PCC/DOX/siRNA體系能有效沉默P-gp，引

4、起細(xì)胞凋亡。體內(nèi)實驗也證明PCC/DOX/siRNA體系具有較好的逆轉(zhuǎn)耐藥能力，能抑制腫瘤生長。
　　3)在藥物耐藥機制的工作中，初步研究了A2780/T細(xì)胞暴露于不同體系對細(xì)胞基因表達的影響，找到了各個體系的差異表達基因。通過GeneMANIA和STRING數(shù)據(jù)庫的分析，發(fā)現(xiàn)A2780/T細(xì)胞長時間暴露于低劑量PTX會對細(xì)胞的周期、凋亡、DNA損傷、氨基代謝等各方面有影響。PCC/PTX和PCC/PTX/siMDR1暴露的細(xì)胞差