正常人和膽石癥患者膽汁泡蛋白成核活性及糖鏈結(jié)構(gòu)的比較.pdf

1、[目的]本文所指的“不同人群”系指“膽固醇結(jié)石患者”和“正常人”，本項(xiàng)研究對(duì)這兩個(gè)群體的膽汁中33.5kDa促成核泡蛋白的成核活性及泡蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)進(jìn)行了比較，以期探討33.5kDa泡蛋白促成核的機(jī)制。具體如下：1)檢測不同人群來源的33.5kDa膽汁泡蛋白促成核活性并進(jìn)行比較。2)分析不同人群來源的33.5kDa膽汁泡蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的異同。3)探討Western-Blot印跡法分析上述泡蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)特點(diǎn)在臨床的初步應(yīng)用價(jià)值。

2、[方法]1)利用超速離心法從正常人及膽石癥患者膽汁中純化33.5kDa膽汁泡蛋白，采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定其純化效果。通過Holan法測定其成核時(shí)間(NT)，比較兩者促成核活性的差異。2)制備HRP-凝集素探針(HRP-ConA、HRP-DSA、HRP-L-PHA、HRP-LCA)，取正常人膽汁及膽石癥患者膽汁，經(jīng)沉淀處理后溶解于樣品緩沖液中，充分混勻后點(diǎn)樣，行SDS-PAGE電泳。電泳結(jié)束后，切取與33.

3、5kDa泡蛋白對(duì)應(yīng)區(qū)帶的凝膠，通過Western-Blot印跡法從凝膠上直接將蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素濾膜上，應(yīng)用HRP-凝集素探針分析不同人群中33.5kDa膽汁泡蛋白糖鏈的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，比較其差異。3)取術(shù)后帶有“T”管的膽石癥患者為治療對(duì)象，按照隨機(jī)序貫原則將膽石癥患者分為兩組(各10例)，即膽寧片治療組和對(duì)照組，術(shù)后第3天起開始給藥，共用藥一周，分別于術(shù)后第3、10天采取患者“T”管膽汁，通過HRP-DSA介導(dǎo)的Western-Bl