CpG ODN對真菌性角膜炎病理改變的影響及免疫機制的實驗研究.pdf

1、目的：探討CpG寡聚脫氧核苷酸(CpGODN)對小鼠真菌性角膜炎病理改變的影響及可能的免疫作用機制。
　　 方法：角膜基質注射法建立BALB/c白色念珠菌性及茄病鐮刀菌性角膜炎模型，按照治療方法不同分為以下五個實驗組：不治療組(A組)、感染同時結膜下注射CpGODN組（B組）、感染同時結膜下注射nonCpGODN組（C組）、感染前48小時預先結膜下注射CpGODN組(D組)及感染前48小時預先結膜下注射nonCpGODN組(E組

2、)。觀察記錄小鼠角膜真菌感染后的角膜大體病變特點和臨床病理損害評分，HE/PAS染色檢查角膜病理改變及真菌生長情況，真菌培養(yǎng)計算角膜真菌載菌量，ELISA法檢測白色念珠菌性角膜炎小鼠角膜、外周血清及體外培養(yǎng)脾細胞中IL-12、IFNγ、IL-10、MCP-1及真菌特異性抗體IgG、IgM、IgA水平，免疫組化檢測白色念珠菌感染后角膜組織中性粒細胞、巨噬細胞及淋巴細胞侵潤情況。
　　 結果：無論是白色念珠菌還是茄病鐮刀菌FK，感染

3、前48hr預先給予CpGODN結膜下注射對角膜真菌感染的小鼠有明顯的免疫保護作用，能明顯減輕小鼠角膜組織的病理改變，與其他各組相比，顯著降低了角膜臨床病理損害評分(p<0.05)，并可有效地減少角膜組織的真菌載菌量(p<0.05)，有利于真菌病原體的清除以及角膜潰瘍的愈合，病程明顯縮短，并不加重角膜組織的炎癥性病理損傷；而感染同時給予CpGODN結膜下注射對真菌性角膜炎小鼠無明顯的保護或治療作用，角膜臨床病理損害評分及角膜組織的真菌載菌

4、量與其他各組無明顯差異(p>0.05)。在白色念珠菌感染小鼠角膜后，CpGODN預先注射組D組小鼠角膜感染后，其血清及角膜組織中IL-12、IFN-γ、IL-10及MCP-1的水平均有不同程度的升高，以IL-12水平的升高最為顯著(p<0.05);IL-12水平從感染第一天驟升后，至感染第14天均持續(xù)較高水平，始終顯著高于A組、C組、D組及E組(p<0.05);IL-10于感染1天驟升后略降低，至第14天接近于正常水平，其感染第一天水平

5、低于D組(p>0.05)，但仍明顯高于A組、C組及E組(p<0.05)；IFN-γ于感染第一天后開始均逐漸升高。而CpGODN感染同時注射的D組小鼠角膜感染后，其血清及角膜組織中的IL-12、IFN-γ在感染第一天也明顯升高，CpGODN感染同時注射組比不注射組小鼠角膜組織及血清中也可產(chǎn)生更多的Th1型細胞因子IL-12、IFN-γ(p<0.05)，但IL-12水平顯著低于B組(p<0.05)；與此同時其感染第一天Th2型細胞因子IL-

6、10及趨化因子MCP-1水平的升高的程度也顯著高于A組、C組、D組及E組(p<0.05)?？傮w上，CpGODN注射組比不注射組小鼠角膜組織及血清中可產(chǎn)生更多的Th1型細胞因子IL-12、IFN-γ(p<0.05)，并且感染早期D組小鼠角膜及血清比B組及其他各組表現(xiàn)了更為強烈的Th1型免疫偏移。同時，CpGODN注射組比不注射組的小鼠脾細胞在體外培養(yǎng)時也可產(chǎn)生更多的Th1型細胞因子IL-12及IFN-γ(p<0.05)。各組小鼠角膜、血清

7、及體外培養(yǎng)的脾細胞中特異性抗體IgG、IgM的IgA水平在感染早期均未見明顯變化。免疫組化結果顯示，CpGODN注射組的小鼠在感染早期比不注射組的小鼠角膜內(nèi)可見更多的中性粒細胞、巨噬細胞及淋巴細胞浸潤。
　　 結論：
　　 本實驗結果顯示，CpGODN預先處理可以激活宿主的抗真菌免疫反應，對小鼠角膜真菌感染具有明顯的免疫保護作用，其可能的免疫作用機制是CpGODN預先處理能促進小鼠全身及局部分泌Th1型細胞因子、促使免疫