趨化因子介導(dǎo)內(nèi)外環(huán)境因素誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥的作用機(jī)制.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。Sampson的經(jīng)血逆流學(xué)說可詮釋腹膜及部分卵巢EMT。正常情況下約有50～90％的育齡婦女發(fā)生經(jīng)血逆流入盆腔；但只有少數(shù)罹患EMT，說明EMT的發(fā)病尚受其它因素影響。逆流子宮內(nèi)膜向腹膜粘附過程中發(fā)生的事件是本研究關(guān)注的焦點(diǎn)。 EMT患者腹腔內(nèi)，免疫活性細(xì)胞的數(shù)量與活性均顯著高于未患EMT婦女。炎性細(xì)胞從血循進(jìn)入組織通過趨化因子的濃度梯度介導(dǎo)，異位組織周圍炎性細(xì)胞的募集可能由種植部位的細(xì)胞合

2、成釋放特定趨化因子所介導(dǎo)。趨化因子生物活性的充分發(fā)揮依賴于與其受體的交聯(lián)，由于二者之間結(jié)合的復(fù)雜性，對趨化因子和受體同時(shí)進(jìn)行研究將更有利于解析其在EMT中的作用地位。從分析異位灶與在位內(nèi)膜的趨化因子受體表達(dá)譜入手，篩選與EMT有關(guān)的趨化因子受體，并對它們及其相應(yīng)配體進(jìn)行研究是確立趨化因子在EMT中作用地位的一個(gè)有效切入口。 異位灶局部趨化因子及其受體的轉(zhuǎn)錄和翻譯受內(nèi)分泌一免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)。EMT是一種雌激素依賴性疾病，雌激素可能是調(diào)

3、控這些趨化因子及其受體表達(dá)的因素之一。此外，人類EMT發(fā)病率升高被認(rèn)為與接觸環(huán)境污染物有關(guān)。大氣污染物TCDD是全球普遍存在的最嚴(yán)重的大氣污染物，有研究發(fā)現(xiàn)與雌激素之間存在聯(lián)系。揭示二者對趨化因子及受體的調(diào)控作用，有助于闡明它們在EMT發(fā)病中的作用機(jī)制。 近年來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種趨化因子參與EMT的發(fā)生，它們不僅擔(dān)任募集炎性細(xì)胞的功能，還有促進(jìn)局部細(xì)胞增殖、參與血管形成等作用。探討相關(guān)趨化因子在異位灶形成中的作用，將為解析EMT發(fā)病機(jī)

4、制提供有價(jià)值的科學(xué)依據(jù)。 本課題擬通過以下研究設(shè)計(jì)，解析趨化因子及其受體在EMT中的表達(dá)調(diào)控及致病機(jī)制： 1．EMT患者異位灶與在位內(nèi)膜趨化因子受體表達(dá)特征 首先用RT-PCR法系統(tǒng)分析18種趨化因子受體在EMT患者在位內(nèi)膜及異位灶的轉(zhuǎn)錄水平，并篩選出異位灶較在位內(nèi)膜高轉(zhuǎn)錄的趨化因子受體(CCR5、CCR8和CXCRl)。免疫組織化學(xué)法在蛋白水平驗(yàn)證上述三種趨化因子受體高表達(dá)于異位灶，同時(shí)證實(shí)在位子宮內(nèi)膜翻譯其相

5、應(yīng)配體RANTES、MIP—lα、1-309和IL-8。進(jìn)一步從EMT患者在位內(nèi)膜中分離、純化子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，RT-PCR法系統(tǒng)分析18種趨化因子受體轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)與在位內(nèi)膜轉(zhuǎn)錄模式基本吻合；流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)了子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞表面CCR5、CCR8和CXCRl的翻譯表達(dá)。本部分研究表明：異位灶和在位內(nèi)膜表達(dá)多種趨化因子受體：與在位內(nèi)膜比較，異位灶高表達(dá)CCR5、CCR8和CXCRl。提示子宮內(nèi)膜在不同微環(huán)境中趨化因子受體表達(dá)發(fā)生改變可能

6、在腹腔內(nèi)種植中起作用。 2．CCR5／RANTES、MIP一1α在EMT中的作用 用不同濃度17p-E2和TCDD以及10-9M17β-E2聯(lián)合lnMTCDD分別處理ESC、HPMC和單核細(xì)胞系U937細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)分析ESC表面CCR5表達(dá)，ELISA法檢測HPMC及U937細(xì)胞分泌相應(yīng)配體RANTES、MIP。1α水平。然后，建立異位灶相關(guān)靶細(xì)胞——ESC、HPMC和U937的細(xì)胞間非接觸和細(xì)胞間接觸共培養(yǎng)系統(tǒng)，分

7、析17B-E2和TCDD單獨(dú)或聯(lián)合處理對不同細(xì)胞共培養(yǎng)系統(tǒng)分泌趨化因子RANTES、MIP一1α的影響。 結(jié)果表明：E2和TCDD單獨(dú)處理抑制ESC表達(dá)CCR5，聯(lián)合應(yīng)用后表達(dá)上調(diào)，且與E2劑量呈正相關(guān)。17β-E2對HPMC和U937分泌RANTES無影響，但可加強(qiáng)TCDD對HPMC分泌RANTES的促進(jìn)作用以及對U937分泌RANTES起抑制作用。HPMC和U937細(xì)胞共培養(yǎng)不僅使RANTES分泌量明顯增加；且17β-E2聯(lián)

8、合TCDD處理發(fā)揮了促進(jìn)作用，這可能是腹腔液中RANTES水平增加的原因。 HPMC和U937細(xì)胞均能分泌較高水平MIP一1α。17β-E2對HPMC和U937細(xì)胞分泌MIP．1α無明顯影響；但TCDD同時(shí)促進(jìn)這兩種細(xì)胞分泌MIP一1α；17B-E2和TCDD聯(lián)合應(yīng)用協(xié)同促進(jìn)MIP．1α的分泌。由此可見，TCDD可能通過誘導(dǎo)腹腔內(nèi)MIP-1α升高參與腹腔對單核巨噬細(xì)胞募集及異位灶的形成。 2．CXCRl／IL．8在EMT

9、中的作用 結(jié)果顯示：ESC表面CXCRl表達(dá)模式與CCR5一致。TCDD促進(jìn)HPMC 分泌IL-8，與17β-E2聯(lián)合后作用更加明顯。17β-E2和TCDD分別單獨(dú)處理抑制U937細(xì)胞分泌IL-8，聯(lián)合后無明顯作用。 ESC-HPMC共培養(yǎng)促進(jìn)IL-8的分泌，17β-E2對共培養(yǎng)系統(tǒng)IL-8的分泌無影響；但可加強(qiáng)TCDD的促進(jìn)作用，說明逆流子宮內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)入腹腔引起的急性炎性反應(yīng)可被E2和TCDD擴(kuò)大；HPMC-U

10、937共培養(yǎng)也對IL-8分泌起促進(jìn)作用；并且較ESC-HPMC更為明顯。以上結(jié)果提示腹腔內(nèi)HPMC和周圍炎性細(xì)胞之間的間接或直接作用是IL-8的主要來源。TCDD促進(jìn)HPMC-U937分泌IL-8，但與17B-E2聯(lián)合后卻明顯抑制該作用。這與炎癥反應(yīng)過程中募集不同類型的免疫活性細(xì)胞相關(guān)。 4．CCR8／I-309參與EMT的作用機(jī)制 流式細(xì)胞術(shù)分析rhI-309對子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞表面整合素p1和僅vp3的表達(dá)率和表達(dá)強(qiáng)度

11、的影響。趨化試驗(yàn)研究rhI-309對ESC及U937細(xì)胞的趨化能力。研究結(jié)果表明：ESC表面p1表達(dá)率很高，1-309能增強(qiáng)其表達(dá)強(qiáng)度；對ανβ3無明顯影響。1-309對ESC無趨化作用，但能夠趨化、募集單核細(xì)胞。因而1-309的功能發(fā)揮具有細(xì)胞靶向性，通過上調(diào)ESC表面粘附分子的表達(dá)直接誘導(dǎo)其粘附，與此同時(shí)募集更多的單核細(xì)胞到達(dá)ESC種植局部，使多種趨化因子在內(nèi)的致炎因子分泌增加，引起免疫微環(huán)境改變，促進(jìn)異位灶形成。 在17β

12、-E2和TCDD對異位灶相關(guān)靶細(xì)胞CCR8／I-309調(diào)控研究中發(fā)現(xiàn)：17β-E2和TCDD均能上調(diào)ESC表面CCR8表達(dá)，聯(lián)合處理無協(xié)同作用。TCDD促進(jìn)U937細(xì)胞分泌1-309；在E2存在的情況下，這種作用更加明顯。HPMC與U937細(xì)胞的直接接觸能夠促進(jìn)1-309的分泌，17β-E2和TCDD單獨(dú)或聯(lián)合作用對比均無明顯影響。腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞侵潤可能由1-309所介導(dǎo)。 綜上所述，本研究首先篩選出異位灶高表達(dá)的趨化因子受體C