URATv1與尿酸結(jié)石形成相關(guān)性研究.pdf

1、尿酸結(jié)石是尿路結(jié)石中比較常見的結(jié)石類型。文獻(xiàn)顯示在我國(guó)尿酸結(jié)石的發(fā)病率約為15％，國(guó)外報(bào)道5％～39．5％。由于尿酸結(jié)石的高復(fù)發(fā)率，所以，了解尿酸結(jié)石的發(fā)病機(jī)制，從而對(duì)有效的防治尿酸結(jié)石具有重要的臨床和社會(huì)意義。目前普遍研究觀點(diǎn)認(rèn)為尿酸結(jié)石形成與高尿酸尿癥相關(guān)。而原尿中的尿酸重吸收減少會(huì)導(dǎo)致尿酸在原尿中蓄積，進(jìn)而引起尿尿酸濃度增加。URATv1是位于人腎小管刷狀緣有機(jī)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體，主要負(fù)責(zé)腎小管上皮細(xì)胞膜表面的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)，在尿酸的重吸收當(dāng)中

2、占有重要地位。當(dāng)其功能發(fā)生異常則可能會(huì)導(dǎo)致尿酸的重吸收減少，增加原尿中尿酸含量。文獻(xiàn)顯示在狗敲除編碼URATv1蛋白的SLC2A9基因可以導(dǎo)致高尿酸尿癥，針對(duì)臨床標(biāo)本的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)SLC2A9與尿路結(jié)石的形成有相關(guān)性，但目前尚未有研究報(bào)道人的URATv1功能異常對(duì)尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影響，以及與高尿酸尿癥的關(guān)系。
　　目的：研究腎小管上皮細(xì)胞HK-2中尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體URATv1表達(dá)受抑制時(shí)該細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)尿酸能力的影響。
　　材料和方

3、法：用RNA干擾技術(shù)（RNAi）干擾URATv1轉(zhuǎn)錄，并帶有綠色熒光蛋白的siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入HK-2細(xì)胞。熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達(dá)量，并進(jìn)一步用熒光定量PCR分別檢測(cè)URATv1的m RNA表達(dá)量變化，以及western blot檢測(cè)URATv1蛋白的表達(dá)量，最后用尿酸試劑盒檢測(cè)HK-2細(xì)胞尿酸重吸收能力的變化。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染后HK-2細(xì)胞成功表達(dá)綠色熒光蛋白，后續(xù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)siRNA干擾后HK-2細(xì)胞內(nèi)URATv1在