p53及Mettl9在缺氧-復(fù)氧C6細(xì)胞株的表達(dá)研究.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)體外培養(yǎng)大鼠膠質(zhì)瘤(C6)細(xì)胞，建立體外缺血及缺血再灌注損傷模型，采用real-time PCR和逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)p53和Mettl9兩種基因在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)。
　　 方法:①體外培養(yǎng)C6細(xì)胞，建立體外缺氧缺糖及缺氧缺糖/復(fù)氧損傷模型，采用乳酸脫氫酶漏出率測(cè)定細(xì)胞損傷程度、MTT比色法測(cè)定細(xì)胞活力和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。②用Real-time PCR和逆轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定p53和Mettl9基因在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)。<

2、br>　　 結(jié)果:
　　 1.不同缺氧/復(fù)氧時(shí)間對(duì)細(xì)胞LDH漏出率的影響:與正常組比較，缺氧組細(xì)胞LDH漏出率明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);與缺氧組相比，缺/復(fù)氧組細(xì)胞LDH漏出率明顯上升(p＜0.01)。
　　 2.不同缺氧/復(fù)氧時(shí)間對(duì)細(xì)胞活力的影響:與正常組比較，缺氧組細(xì)胞活力明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H4、H8、H12組p＜0.01，H24組p＜0.05），在12h細(xì)胞活力最低;與缺氧組比，缺/復(fù)氧

3、組細(xì)胞活力明顯增強(qiáng)(p＜0.01)。
　　 3.不同氧/復(fù)氧時(shí)間對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響:與正常組比較，缺氧組細(xì)胞凋亡明顯增多(p＜0.01)，在缺氧12h處凋亡率達(dá)到最大，24h處凋亡率有下降趨勢(shì);與缺氧組比較，缺/復(fù)氧組細(xì)胞凋亡率明顯上升(p＜0.05)。
　　 4.Real-time PCR測(cè)定不同缺氧/復(fù)氧時(shí)間對(duì)p53和Mettl9基因的
　　 本研究得到國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):30770838)資助表達(dá)的影響

4、:①M(fèi)ettl9基因:與正常組比較，其表達(dá)在8h處開(kāi)始明顯上調(diào)(p＜0.01)，并具時(shí)間依賴性;在缺/復(fù)氧組，與缺氧組比較，H4/R8組(p＜0.01)和H8/R8組(p＜0.05) Mettl9的表達(dá)均明顯上調(diào)，具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②p53基因:缺氧8h、12h和24h表達(dá)均上調(diào)(p＜0.01)，以缺氧8h表達(dá)上調(diào)最明顯;缺/復(fù)氧組，與缺氧組比較，除4h組，其余有下降趨勢(shì)。
　　 5.逆轉(zhuǎn)錄PCR測(cè)定不同缺氧/復(fù)氧時(shí)間對(duì)p53和Me