人賁門癌組織中Anexin1，NOS2和COX2的表達(dá)及意義.pdf

1、背景和目的：胃癌(gastriccarcinoma,GC)是起源于胃腺上皮的惡性腫瘤，是世界上最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率居人類所有惡性腫瘤的前二位。根據(jù)腫瘤的發(fā)生部位，GC可以分為遠(yuǎn)端胃癌和賁門癌(gastriccardiaadenocarcinoma，GCA)。近年的研究發(fā)現(xiàn)，伴隨胃癌總體發(fā)病率的下降，胃癌中賁門癌的比例卻有了顯著的升高。目前，手術(shù)切除是比較確定的賁門癌根治的可能手段。早期賁門癌患者術(shù)后5年生存率可達(dá)90％

2、，而中、晚期患者5年生存率僅為10％左右，預(yù)后極差。因此，賁門癌患者的早期診斷成為決定預(yù)后的關(guān)鍵因素，尋找賁門癌早期診斷的分子生物學(xué)指標(biāo)也成為賁門癌研究的方向和熱點(diǎn)之一。 研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟、多基因參與的多階段的綜合演進(jìn)過程。同樣，賁門癌的發(fā)生也遵循這一個(gè)過程。目前認(rèn)為，賁門癌的發(fā)生和幽門螺桿菌(helicobacterpylori，Hp)感染、環(huán)境因素、遺傳因素有關(guān)。各種因素導(dǎo)致癌基因、抑癌基因和DN

3、A損傷修復(fù)基因的表達(dá)改變，破壞了胃黏膜上皮細(xì)胞增殖和凋亡的動(dòng)態(tài)平衡，導(dǎo)致了賁門癌的發(fā)生。尤其是Hp，作為慢性胃炎的主要病因，已被看作是人類胃癌的Ⅰ類(即肯定的)致癌原。Hp的抗原及毒素有致病性，導(dǎo)致胃黏膜病變，自活動(dòng)性淺表性炎癥發(fā)展為萎縮、腸化及不典型增生，在此基礎(chǔ)上易發(fā)生癌變。研究表明，Hp感染能導(dǎo)致胃黏膜表達(dá)環(huán)氧合酶2(cycloxygenase2，COX2)和一氧化氮合酶2(nitricoxidesynthase2，NOS2)增加

4、。NOS2和COX2的表達(dá)改變亦見于其他的炎癥及腫瘤組織。COX2是前列腺素(prostaglandins，PGs)生物合成過程中的重要限速酶，PGs在腫瘤發(fā)生中具有影響有絲分裂，促進(jìn)細(xì)胞黏附，抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生及降低免疫監(jiān)視，促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)等作用。COX2的表達(dá)增高往往提示炎癥或腫瘤的存在。作為一種誘導(dǎo)型酶，NOS2在正常組織中不表達(dá)或極微量表達(dá)，而在病理狀態(tài)下則大量表達(dá)，繼而產(chǎn)生大量一氧化氮(nit

5、rogenmonoxidum，NO)。NO可以擴(kuò)張腫瘤組織中的小血管和促進(jìn)腫瘤血管生成，且能增加血管的通透性，從而保證腫瘤最大血液供應(yīng)和維持腫瘤生長。 近年的研究表明，作為鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白家族成員之一的鈣磷脂結(jié)合蛋白1(annexin1)，廣泛分布于人體的不同組織，并參與炎癥反應(yīng)，細(xì)胞骨架活動(dòng)，細(xì)胞分泌，磷脂化與膜受體的功能調(diào)節(jié)，細(xì)胞增殖與分化，凋亡信號傳導(dǎo)等過程，在許多炎癥及腫瘤組織中有表達(dá)改變。并且，研究還發(fā)現(xiàn)，an

6、nexin1對COX2及NOS2的表達(dá)具有重要的調(diào)節(jié)作用。本研究擬用免疫組織化學(xué)的方法，從蛋白水平檢測賁門癌組織中annexin1的表達(dá)，以探討annexin1在賁門癌發(fā)病中的作用，及與COX2、NOS2表達(dá)的相關(guān)性，以期進(jìn)一步探明賁門癌癌變機(jī)制，發(fā)現(xiàn)早期、敏感、特異的分子生物學(xué)診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)。 材料與方法：收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院2002年1月-2005年1月手術(shù)切除治療的賁門癌患者賁門癌組織標(biāo)本60例，年齡在35～78歲

7、，其中男性42例，平均年齡53.2±7.0歲，女性18例，平均年齡54.0±6.6歲?；颊呔窗榘l(fā)其他惡性腫瘤，術(shù)前亦均未接受任何形式的放療和/或化療，所有標(biāo)本經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)為原發(fā)性賁門腺癌。同時(shí)，取正常賁門組織20例作正常對照。所取組織均經(jīng)10％福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包埋、5μm連續(xù)切片，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查和免疫組織化學(xué)檢查。采用免疫組織化學(xué)鏈霉-親和素-生物素復(fù)合物(Strep-Avidin-BiotinComplex，SAB

8、C)法，檢測賁門癌患者手術(shù)切除標(biāo)本中annexin1，NOS2和COX2蛋白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：x2檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異性比較，Spearman秩相關(guān)作相關(guān)性分析，顯著性水準(zhǔn)α定為0.05。 結(jié)果：(1)annexin1免疫組化結(jié)果：annexin1在賁門癌組織中的陽性表達(dá)率為75.0％(45/60)，陰性表達(dá)率為25.0％(15/60)；在正常賁門黏膜的陽性率為20.0％(4/20)，明

9、顯低于在癌組織中的表達(dá)(P=0.000)。經(jīng)相關(guān)性分析，annexin1陽性表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的分化程度顯示有相關(guān)性，與腫瘤的浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期未顯示出相關(guān)性； (2)NOS2免疫組化結(jié)果：NOS2在賁門癌組織中的陽性表達(dá)率為63.3％(38/60)，陰性表達(dá)率為36.7％(22/60)；在正常賁門黏膜的陽性率為25.0％(5/20)，明顯低于在癌組織中的表達(dá)(P=0.003)。NOS2陽性表達(dá)與有無遠(yuǎn)處

10、轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)，與分化程度及腫瘤浸潤深度無關(guān)； (3)COX2免疫組化結(jié)果：COX2在賁門癌組織中的陽性表達(dá)率為70.0％(42/60)，陰性表達(dá)率為30.0％(18/60)；在正常賁門黏膜的陽性率為20.0％(4/20)，明顯低于在癌組織中的表達(dá)(P=0.002)。COX2陽性表達(dá)與賁門癌患者腫瘤組織的分化程度、癌細(xì)胞的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均顯示出相關(guān)性； (4)annexin1在原發(fā)性賁門

11、癌組織中的表達(dá)與NOS2及COX2的表達(dá)均未顯示相關(guān)性，NOS2及COX2在賁門癌組織中的表達(dá)顯示出明顯的相關(guān)性。 結(jié)論：(1)賁門癌組織中annexin1陽性表達(dá)率增加，且與賁門癌細(xì)胞分化程度顯著相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期、浸潤程度無相關(guān)性，提示annexin1表達(dá)增加可能是賁門組織癌變過程早期的重要分子事件，可能是判定賁門組織癌變的一個(gè)重要參考指標(biāo)，但對賁門癌的發(fā)展及預(yù)后判斷方面的價(jià)值尚需進(jìn)一步研究；

12、(2)賁門癌組織中annexin1表達(dá)與NOS2及COX2未顯示相關(guān)性，提示annexin1可能通過與NOS2及COX2的相對獨(dú)立的機(jī)制參與賁門組織癌變過程； (3)賁門癌組織中NOS2陽性表達(dá)率增加，且與賁門癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(guān)，與分化程度及浸潤程度無關(guān)，提示NOS2表達(dá)增加是賁門癌變過程的中、晚期分子事件，對判定賁門組織的癌變及預(yù)后判斷具有一定的參考價(jià)值； (4)賁門癌組織中COX2陽性表達(dá)