PDGF-A和PDGF-B與甲狀腺乳頭狀癌關系的初步研究.pdf

1、甲狀腺乳頭狀癌是最常見的甲狀腺惡性甲狀腺腫瘤，約占成人甲狀腺癌的60﹪-80﹪和兒童甲狀腺癌的70﹪左右，具有臨床生物學特性多樣、總體惡性度較低、預后良好等特點。甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病機制是一個復雜的過程，至今仍未明了。隨著分子生物學的發(fā)展，人們對甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病機制的認識逐漸增加，近年來證實甲狀腺乳頭狀癌中存在多種癌基因和抑癌基因的異常，各種病因導致的癌基因的激活和抑癌基因的失活可使正常細胞轉化為生長失控的惡性腫瘤細胞，而大多數癌基

2、因與調控正常細胞分裂生長的各種生長因子及其受體密切相關。血小板源性生長因子(platelet-derived growth factor,PDGF)是由多種細胞產生的肽類生長因子，是在人體各器官組織廣泛存在的一種有絲分裂原和化學趨化劑，在人體許多正常生理活動中有著重要作用。PDGF-B鏈基因與猴肉瘤病毒的癌基因v-sis有92﹪的同源性，因此PDGF-B鏈基因又稱c-sis原癌基因。近年來隨著對PDGF研究的深入，人們逐漸發(fā)現PDGF參

3、與了多種人類疾病的發(fā)生和發(fā)展，并被證實與多種人類惡性腫瘤有著密切的關系。在人卵巢癌、膠質母細胞瘤及乳腺癌等惡性腫瘤中相繼發(fā)現PDGF的高表達，并認為它在某些惡性腫瘤中與腫瘤特征性的血管生成和轉移密切相關。 Matsuo K等發(fā)現在人甲狀腺乳頭狀癌細胞系NPA培養(yǎng)過的條件培養(yǎng)基中有能強烈促進NIH3T3細胞系生長的物質，其促有絲分裂的活性可被PDGF-BB抗體部分阻斷，經鑒定為PDGF-B鏈樣的蛋白物質，而在人甲狀腺濾泡狀癌細胞系’WRO

4、中卻沒有這種物質，由此認為人甲狀腺乳頭狀癌細胞系NPA可分泌大量PDGF-B樣的蛋白物質，此種物質可能對人甲狀腺乳頭狀癌特征性乳頭狀結構的形成具有重要作用。本實驗的目的是通過RT-PCR和免疫組化技術檢測甲狀腺乳頭狀癌組織中PDGF-A鏈和PDGF-B鏈的mRNA及蛋白的表達，初步探討PDGF與甲狀腺乳頭狀癌的關系。 材料與方法 第一部分 取行甲狀腺乳頭狀癌根治術患者術中切除的癌組織標本13例(病例組)．術后經病

5、理檢驗證實為甲狀腺乳頭狀癌。另選取結節(jié)性甲狀腺腫患者或甲狀腺腺瘤患者手術切除的甲狀腺組織中肉眼觀察相對正常的甲狀腺組織標本13例作為對照組。全部標本切除后迅速置于液氮中速凍，保存于液氮中。所有標本熱缺血時間不超過30分鐘。用Trizol試劑提取組織總RNA，然后采用RT-PCR技術研究病例組與對照組的PDGF-A鏈和PDGF-B鏈的mRNA表達情況。將每個RT-PCR擴增產物在1﹪瓊脂糖凝膠上電泳、觀察、成像。經圖像分析獲得目的條帶的積

6、分光密度后，將各條泳道目的條帶的積分光密度值與同泳道GAPDH條帶積分光密度值相比，得到積分光密度的相對值，以此作為數據，用SAS8.1軟件包進行隨機樣本t檢驗對比病例組標本與對照組標本間PDGF-A和PDGF-B mRNA表達量差異。 第二部分 35例甲狀腺乳頭狀癌組織標本(病例組)取自中山大學第一附屬醫(yī)院2002年-2006年行甲狀腺癌根治術患者存檔的石蠟塊，患者術前均未經過任何抗腫瘤治療，術后經病理檢驗證實為甲狀腺

7、乳頭狀癌。35例正常的甲狀腺組織標本(對照組)取自中山大學第一附屬醫(yī)院2002年-2006年甲狀腺腺瘤或節(jié)結性甲狀腺腫手術患者切除標本的存檔石蠟塊中相對正常的甲狀腺組織。所有標本均41μm厚連續(xù)切片，經HE染色病理確診排除其他疾病并符合以上條件的方可入選。分別選用PDGF-A鏈和PDGF-B鏈兔抗人多克隆抗體免疫組化染色檢測PDGF-A鏈和PDGF-B鏈蛋白表達情況。免疫組化切片在顯微鏡下觀察染色情況，計算每張切片的HSCORE(his

8、tochemicalscore)得分，并以HSCORE得分代表該張切片PDGF-A鏈和PDGF-B鏈蛋白表達的水平，采用Wilcoxon秩和檢驗比較病例組與對照組數據，以P<0.05作為顯著性意義的標準。 結果：第一部分： 統(tǒng)計結果顯示，病例組與對照組之間PDGF-A鏈和PDGF-B鏈mRNA的表達均存在顯著性差異(P<0.05)，病例組中PDGF-A鏈和PDGF-B鏈mRNA的表達均較對照組明顯上調。 第二部分

9、： 1．PDGF-A鏈主要表達于腫瘤細胞的胞漿中，在細胞膜上也有表達，而在癌旁的間質中僅有少量表達。甲狀腺乳頭狀癌病例組(HSCORE中位數=1.92,SEM=0.46)與對照組(HSCORE中位數0.38，SEM=0.05)：PDGF-A鏈的表達有顯著差異，P<0.05。PDGF-A鏈在甲狀腺乳頭狀癌病例組中較對照組明顯過度表達。 2．PDGF-B鏈也主要表達于腫瘤細胞的胞漿中，在細胞膜上也有表達，癌旁的間質中僅有少量

10、表達。甲狀腺乳頭狀癌病例組(HSCORE中位數=1.64，SEM=0.32)與對照組(HSCORE中位數=0.29，SEM=0.09)PDGF-B鏈的表達同樣存在顯著性差異，P<0.05。PDGF-B鏈在甲狀腺乳頭狀癌病例組中較對照組明顯過度表達。 結論 1．PDGF-A鏈和PDGF-B鏈均主要表達在腫瘤細胞胞漿中。PDGF-A鏈在甲狀腺乳頭狀癌病例組中在mRNA和蛋白兩個水平上較正常對照組均存在明顯上調。病例組PDGF