長(zhǎng)期繼代的柑橘愈傷組織中轉(zhuǎn)座子激活研究.pdf

1、愈傷組織以其繁殖速度快、易于保存等優(yōu)點(diǎn)被認(rèn)為是果樹(shù)種質(zhì)資源離體保存的一種方式，然而愈傷組織在組織培養(yǎng)中會(huì)存在許多遺傳變異。轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座激活也被證實(shí)是導(dǎo)致遺傳變異的分子機(jī)制之一，近幾年的研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子還參與到了基因組進(jìn)化、基因表達(dá)調(diào)控、逆境響應(yīng)等過(guò)程。研究果樹(shù)轉(zhuǎn)座子激活有助于為降低種質(zhì)保存的遺傳變異提供分子基礎(chǔ)，有助于為創(chuàng)新種質(zhì)資源提供新方法，有助于為理解果樹(shù)芽變提供新思路。本課題檢測(cè)了長(zhǎng)期保存后的柑橘愈傷的體細(xì)胞胚胎發(fā)生能力，利用Tra

2、nsposon Display(TD)、Southern雜交、定量PCR等方法檢測(cè)了長(zhǎng)期保存的柑橘愈傷中轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座活性，同時(shí)探索了誘導(dǎo)轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座激活的因素，主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.長(zhǎng)期繼代保存的伏令夏橙愈傷組織依然保留著體細(xì)胞胚胎發(fā)生能力，本研究所用的9個(gè)長(zhǎng)期繼代的該品種愈傷系材料中6個(gè)具有胚胎發(fā)生能力，經(jīng)流失細(xì)胞儀鑒定，胚狀體能保持原來(lái)的倍性。然而，6個(gè)愈傷系材料的胚狀體中僅有1個(gè)愈傷系能夠生芽。因此長(zhǎng)期繼代保存會(huì)對(duì)柑橘愈

3、傷的體細(xì)胞胚胎發(fā)生能力產(chǎn)生影響。
　　2.TD實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在長(zhǎng)期保存柑橘愈傷中，Csgypsy1、Csgypsy2、Cscopia3、CsMuDR1、CsMITE1、Cs Tcs1、Cscopia1、CshAT1有單套染色體轉(zhuǎn)座子拷貝數(shù)的變化。其中Cs gypsy1和Csgypsy2在愈傷中其單套染色體轉(zhuǎn)座子拷貝數(shù)隨著愈傷倍性增加而增加，這一結(jié)論也在Cscopia3的Southern雜交結(jié)果中得到證實(shí)。同時(shí)，通過(guò)DNA甲基化敏感

4、內(nèi)切酶的Southern雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果也說(shuō)明了轉(zhuǎn)座子區(qū)域確實(shí)存在一定程度的DNA甲基化。
　　3.定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Csgypsy2、Cscopia3、CsMuDR1、CsMITE1的轉(zhuǎn)錄水平都比較低，而Csgypsy1卻有較高的轉(zhuǎn)錄水平，說(shuō)明不同轉(zhuǎn)座子類(lèi)型轉(zhuǎn)錄活性差別較大。低溫逆境會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)座子CsGypsy1、Cscopia3在部分柑橘愈傷系中的轉(zhuǎn)錄水平升高，TD實(shí)驗(yàn)也證明Cscopia3的拷貝數(shù)隨著冷處理的時(shí)間延長(zhǎng)而增加。