離子特異性DNA酶應(yīng)用于人體全血鉛檢測的方法學(xué)建立及評價.pdf

1、目的：建立基于新型核酸酶傳感器(鉛離子特異性DNA酶)的血鉛檢測體系,并對該體系應(yīng)用于臨床檢測進(jìn)行方法學(xué)評價。
　　 方法：
　　 一、離子特異性DNA酶檢測人體全血鉛方法的建立
　　 全血樣本經(jīng)聚乙二醇辛基苯基醚處理使紅細(xì)胞裂解,依次使用蛋白酶K消化、硝酸及三氯乙酸處理后使蛋白消化沉淀,鉛元素以二價離子形式釋放至反應(yīng)溶液中。溶液中的鉛誘導(dǎo)鉛離子特異性DNA酶切割熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)釋放熒光信號。熒光增長速率與鉛離

2、子濃度成正比。以標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定檢測線性范圍,測定血鉛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以評價準(zhǔn)確度、精密度及回收率。
　　 二、鉛離子特異性DNA酶應(yīng)用于臨床全血鉛檢測的方法學(xué)比較研究
　　 選擇44例臨床全血樣本,分別采用石墨爐原子吸收光譜法和鉛離子特異性DNA酶法檢測血鉛含量,對兩種檢測方法得到的數(shù)據(jù)分析處理,評價其相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 一、鉛離子特異性DNA酶檢測人體全血鉛方法的建立
　　 成功

3、建立鉛離子特異性DNA酶測定全血鉛的樣本前處理方法及檢測體系。檢測線性范圍良好(0-2000nmol/L,r2=0.9988),方法檢出限2.20nmol/L。血鉛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢測的準(zhǔn)確度及精密度良好,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.99％和1.35％,方法回收率89.06％-97.06％。
　　 二、鉛離子特異性DNA酶應(yīng)用于臨床全血鉛檢測的方法學(xué)比較研究
　　 本課題建立的鉛離子特異性DNA酶血鉛測定方法與國際推薦的石墨爐原子吸收