微孔技術(shù)注入IGF-1對慶大霉素致聾豚鼠治療作用的研究.pdf

1、感音神經(jīng)性聾是耳鼻咽喉科常見病，據(jù)最新的第二次抽樣調(diào)查，全國約有2004萬耳聾病人。發(fā)病原因公認有缺血、病毒感染、耳毒性藥物中毒及老年性退行性變等。病理改變主要是毛細胞損傷、螺旋神經(jīng)節(jié)、支持細胞及神經(jīng)末梢的器質(zhì)性改變。相當多治療效果不佳，并且至今沒有很好的方法。藥物治療無效的患者只有配戴助聽器或行人工耳蝸植入術(shù)。 近年來一些研究報道了哺乳動物甚至人的內(nèi)耳前庭及耳蝸毛細胞在受傷后可能再生。臨床上可見到一些在慶大霉素治療后雙耳重度感

2、音神經(jīng)性聾患者，在停藥三周后聽力在低頻區(qū)提高15-20dB，3個月后所有頻率均有10-25dB的恢復。這些現(xiàn)象說明人類前庭和耳蝸功能的恢復與鳥類內(nèi)耳毛細胞再生及功能恢復相一致的現(xiàn)象是可能存在的。同時，近幾年許多研究證明，體外培養(yǎng)的耳蝸Corti器用生長因子類物質(zhì)可促進內(nèi)耳受損的神經(jīng)和毛細胞修復再生。給耳聾治療帶來了極大的希望，但有關哺乳動物的在體試驗尚未取得成功。 胰島素樣生長因子(insulin-like growth fac

3、tor，IGF)是一類廣泛存在機體的多種器官和組織中的蛋白多肽，因其基因結(jié)構(gòu)和胰島素具有高度同源性，具有類似胰島素的作用而得名。尤其以胰島素樣生長因子-1(insulin-like growthfactor-1，IGF-1)在有促進機體的生長發(fā)育、促進組織修復、促進物質(zhì)及營養(yǎng)代謝、降低血糖和促進細胞分化分裂增殖等方面起著類似絲裂素及胰島素樣重要的生物學作用。IGF-1的生物學效應可通過自分泌和旁分泌來實現(xiàn)，通過靶細胞表面的特異性受體介導

4、，是內(nèi)耳正常發(fā)育中不可缺少的調(diào)節(jié)因子，可以調(diào)節(jié)聽泡細胞的增殖、死亡和神經(jīng)元的發(fā)育和分化。所以推測，IGF-1可以作為一種較有前途的，能促進內(nèi)耳毛細胞再生和促進聽神經(jīng)修復，可以治療毛細胞和聽神經(jīng)受損所致聽力障礙的藥物。內(nèi)耳由于耳蝸的骨性結(jié)構(gòu)及具有血一腦和血一迷路雙重屏障的存在，使耳蝸成為一個相對封閉的微環(huán)境，可能使大多數(shù)蛋白類生長因子和神經(jīng)營養(yǎng)藥物難以有效充分的到達內(nèi)耳，故給許多內(nèi)耳疾病治療帶來了極大的困難。近年來，耳蝸鼓階開窗便成為基因

5、、細胞生長因子等導入耳蝸的重要途徑。在開窗術(shù)的基礎上，將開窗孔徑控制在盡量不影響聽力的范圍內(nèi)而產(chǎn)生了微孔技術(shù)。Stover<'[11]>等研究認為，經(jīng)鼓階鉆孔及通過圓窗膜途徑注射病毒載體對聽力沒有明顯影響。我科現(xiàn)在已成功完成了150多例電子耳蝸植入術(shù)，電子耳蝸植入術(shù)實際上即是鼓階開窗、微孔技術(shù)的應用，并進行電極的插入，對本項研究中有一定的借鑒作用。趙長青曾用耳蝸微孔技術(shù)行豚鼠耳蝸灌注進行誘發(fā)電位的研究，發(fā)現(xiàn)用耳蝸微孔技術(shù)進行內(nèi)耳開窗，絕

6、大多數(shù)聽力損失在0-5dB，且1-2周內(nèi)可恢復正常。高鵬飛等認為豚鼠鼓階開窗(直徑約為0.6mm)修復后對其聽閾和聽毛細胞無明顯影響。所以我們通過耳蝸微孔技術(shù)將IGF-1注入耳蝸進行感音神經(jīng)性聾的治療，可以基本忽略手術(shù)本身對聽力的影響。 本實驗為課題研究的動物實驗部分，擬用慶大霉素制造感音神經(jīng)性聾的動物模型，然后通過在豚鼠耳蝸底回開窗，微孔注IGF-1入鼓階，來研究IGF-1對慶大霉素致耳聾豚鼠的治療作用，為臨床治療研究提供實驗

7、依據(jù)。 目的 探討通過鼓階開窗，微孔技術(shù)注IGF-1入內(nèi)耳，研究IGF-1對感音神經(jīng)性聾動物模型(慶大霉素致耳聾豚鼠)的治療作用。 方法 1．材料： 選取健康雜色黑目豚鼠50只(二級、南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院實驗動物中心提供)，體重為250-300g，雌雄不拘，耳廓反射靈敏，鼓膜完整、標志清楚，ABR．檢查排除聽力異常者。 2．實驗步驟： 試驗主要分四部分進行： (1)將50只

8、豚鼠按照隨機化原則均分為兩組：設A組(正常對照組，25只)、B組(慶大霉素致耳聾模型組，25只)。A組正常條件下飼養(yǎng)，B組肌注慶大霉素(GM)連續(xù)28天，用聽性腦干誘發(fā)電位監(jiān)測造模效果。 (2)改進實驗方法，研究清醒狀態(tài)能否取代麻醉狀態(tài)來進行豚鼠ABR．測試，以降低豚鼠(尤其是慶大霉素致耳聾豚鼠)的意外死亡率，保證實驗順利進行。 (3)造模完成后，將A組選20只隨機均分為Ⅰ組(正常組，10只)，Ⅱ組(手術(shù)組，10只)

9、；將Ⅰ組正常飼養(yǎng)，Ⅱ組行內(nèi)耳鼓階開窗，微孔注入術(shù)。了解手術(shù)對豚鼠聽力及耳蝸組織結(jié)構(gòu)的影響。 (4)B組選20只隨機均分Ⅲ組(GM組，10只)，Ⅳ組(IGF-1組，10只)。Ⅲ、Ⅳ組行內(nèi)耳鼓階開窗，Ⅲ組在鼓階內(nèi)注入人工外淋巴液、Ⅳ組微孔注入IGF-1。研究IGF-1對GM致聾豚鼠的治療作用。 每部分實驗中，進行統(tǒng)計學分析(所有數(shù)據(jù)均由測聽系統(tǒng)電腦記錄，采用SPSS13.0軟件包進行數(shù)據(jù)處理，用相應方法進行統(tǒng)計學分析)和形態(tài)

10、學觀察(利用光鏡，掃描電鏡，透射電鏡進行形態(tài)學觀察研究)。 結(jié)果 1．B組注射慶大霉素28天后與A組反應閾有顯著差異(P<0.01)。 2．A組在清醒和麻醉狀態(tài)下反應閾，Ⅰ、Ⅲ波間期無顯著差異(P>0.05)3．Ⅰ組和Ⅱ組反應閾在術(shù)后7天無顯著差異(P>0.05)。Ⅱ組反應閾在術(shù)前1小時和術(shù)后7天無顯著差異(P>0.05)。4．Ⅲ組和Ⅳ組反應閾在術(shù)后14天有顯著差異(P<0.01)。Ⅳ組反應閾在術(shù)前與術(shù)后14天比

11、有顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論 1、慶大霉素具有耳毒性，但腎毒性較其他氨基糖甙類抗生素小，價格便宜，臨床應用廣泛，較易獲得，是制造感音神經(jīng)性聾動物模型的理想藥物。 2、ABR測試具有波形穩(wěn)定易辯，記錄方便，從其波形的反應閾、各波潛伏期、波間期、振幅等可以分析聽覺腦干通路及其附近結(jié)構(gòu)的生理病理情況，是客觀評價豚鼠聽力變化的理想指標。 3、由郭夢和教授研制的“聽覺電生理動物實驗平臺”測聽系統(tǒng)準確可靠，簡便