鼻腔遞送IGF-1對HIBD大鼠大腦的作用及FOXG1基因的表達.pdf

1、目的：
　　 應用新生7日齡SD大鼠建造缺氧缺血性腦損傷(HIBD)動物模型,經鼻腔遞送胰島素樣生長因子-1(IGF-1),免疫組化法檢測內源性神經干細胞增殖、遷移、分化情況,探索IGF-1對神經的營養(yǎng)保護作用;RT-PCR法檢測HIBD后各組大鼠Foxg1mRNA表達變化情況,探索IGF-1對其表達的影響。。
　　 材料與方法：
　　 取7日齡SD新生大鼠,單純隨機分為假手術組、模型對照組、IGF-1干預組。每

2、組按處死時間點不同,又分為HIBD后1d、3d、5d、7d、14d等5個亞組,共15個亞組。采用Rice法制作新生大鼠HIBD動物模型。模型對照組于HI后1h鼻腔遞送生理鹽水0.1ml;IGF-1干預組于HI后1h鼻腔遞送IGF-12.5μg;假手術組僅分離頸總動脈,不結扎不缺氧,不鼻腔灌注。選用5’-嗅尿嘧啶(Brdu)標記新增殖細胞,巢蛋白(Nestin)標記神經干細胞,神經元特異性烯醇化酶(NSE)標記成熟神經元,膠質纖維酸性蛋白

3、(GFAP)標記星形膠質細胞,Brdu-Nestin標記新增殖的神經干細胞,Brdu-NSE標記增殖細胞分化的神經元,Brdu-GFAP標記增殖細胞分化的星形膠質細胞。分別于術后1、3、5、7、14d處死大鼠。用于免疫組化實驗的大鼠,在處死前一天被腹腔注射Brdu(50mg/kg次,共3次),最后一次注射4小時后斷頭取腦,固定、切片,HE染色觀察腦損傷組織形態(tài)結構變化;單、雙標免疫組化染色法檢測側腦室室管膜下區(qū)(SVZ)、海馬區(qū)以及皮層

4、區(qū)Brdu陽性細胞、Brdu-Nestin、Brdu-NSE、Brdu-GFAP雙陽性細胞數;用于RT-PCR實驗的大鼠,常規(guī)斷頭取腦,半定量RT-PCR法檢測各組大鼠腦組織Foxg1mRNA的表達。
　　 結果：
　　 1模型鑒定
　　 大鼠制模前行為能力均正常,制模后翻身不能,夾尾不叫,夾尾左旋,常規(guī)HE染色顯示結扎側出現明顯的病理變化,主要為神經元壞死,出現“紅色神經元”。
　　 2免疫組化結果

5、r>　　 ①Brdu陽性細胞、Brdu-Nestin雙陽性細胞:模型對照組術后第1天開始增多,3天達高峰,7天減少,14天明顯減少,1d、3d、5d、7d、14d的Brdu陽性細胞數分別為:321.00±23.02、368.00±26.07、384.00±27.93、342.00±20.25、157.00±20.25;Brdu-Nestin雙陽性細胞分別為:10.00±2.28、24.00±5.66、21.00±3.41、15.00±

6、3.41、8.00±2.83;IGF-1干預組術后第1天增加明顯,3天顯著增多,5天達高峰期,7天稍減少,14天明顯減少,Brdu陽性細胞數值分別為:357.00±11.40、438.00±20.25、476.00±27.39、385.00±11.83、204.00±22.80;Brdu-Nestin雙陽性細胞分別為:18.00±3.41、43.00±7.07、85.00±7.07、56.00+7.07、37.00±3.41;假手術組無

7、明顯增殖現象,隨著時間的延長漸漸恢復到靜息狀態(tài),Brdu陽性細胞數分別為240.00±21.21、200.00±7.07、120.00±7.07、60.00±10.00;Brdu-Nestin幾無表達。在同一時間點各組間比較,IGF-1干預組高于模型對照組高于假手術組,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);②Brdu-NSE、Brdu-GFAP雙標陽性細胞:模型對照組術后第7天開始出現,但胞體小,突起細、短,第14天細胞數增多,且胞體增大

8、,突起增粗、增長,Brdu-NSE每個時間點數值為:15.00±2.27、25.00±3.96;Brdu-GFAP數值分別為:35.00±3.96、45.00+4.72;IGF-1干預組術后第5天就有少量陽性細胞,第7天在腦部有明顯增加,14天增多達高峰,每個時間點數值分別為:Brdu-NSE:40.00±10.06、50.00±6.39;BrdU-GFAP:20.00±3.42、26.00±6.28。假手術組無表達。同一時間點兩組比較

9、,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3半定量RT-PCR結果
　　 假手術組Foxg1mRNA的表達基本穩(wěn)定,無明顯的變化,第1、3、5、7、14d的結果分別為0.77±0.046、0.65±0.134、0.76±0.041、0.68±0.047、0.72±0.024;模型對照組:前3天FoxglmRNA的表達減少,3天后開始增加,7天時接近假手術組,結果分別為0.60±0.037、0.53±0.056、0.6

10、2±0.054、0.74±0.053、0.78±0.043;IGF-1干預組:Foxg1mRNA的表達趨勢與模型對照組相同,但表達量高于同時間的對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),結果分別為0.65±0.054、0.64±0.059、0.73±0.051、0.80±0.051、0.84+0.051。
　　 結論
　　 鼻腔遞送IGF-1能促進HIBD后內源性神經干細胞的增殖、分化;IGF-1也能促進Foxg1基因的