hENT1、CREPT與胰腺癌化療耐藥及預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 hENT1與胰腺癌吉西他濱化療耐藥的關(guān)系
　　胰腺癌發(fā)病隱匿、進展快、惡性度高、預(yù)后極差，發(fā)病率和死亡率幾乎相同?；熌退幨悄壳耙认侔┭芯康钠款i，尋找化療耐藥標記物，預(yù)測個體化療療效，制定個體化化療方案是改善胰腺癌患者預(yù)后的重要手段。hENT1是吉西他濱進入細胞的主要轉(zhuǎn)運體，有文獻報道其可能與胰腺癌化療耐藥性相關(guān)。然而，目前關(guān)于hENT1與胰腺癌關(guān)系的基礎(chǔ)研究尚不系統(tǒng)，臨床研究方

2、面受患者選擇、hENT1檢測等影響，結(jié)論多不統(tǒng)一。本研究擬通過體外及體內(nèi)實驗系統(tǒng)探索hENT1與胰腺癌細胞表型的關(guān)系，并分析腫瘤組織hENT1表達量與胰腺癌患者吉西他濱化療預(yù)后的關(guān)系。
　　研究目的：
　　探索hENT1與胰腺癌細胞表型的關(guān)系，分析腫瘤組織hENT1表達量與胰腺癌患者吉西他濱化療預(yù)后的關(guān)系。
　　研究方法：
　　檢測已有胰腺癌細胞株hENT1表達量。選擇hENT1表達量較高的細胞株進行hENT1基

3、因沉默，hENT1表達量較低的細胞株進行hENT1基因過表達，構(gòu)建穩(wěn)定過表達/沉默hENT1基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株及相應(yīng)陰性對照株。檢測hENT1基因?qū)σ认侔┘毎鲋?、化療敏感性、遷移、侵襲的調(diào)控作用。構(gòu)建裸鼠皮下種植瘤模型，進一步檢測hENT1對胰腺癌細胞化療耐藥的作用。進行回顧性臨床研究，通過免疫組化檢測胰腺癌組織hENT1表達量，分析其與胰腺癌患者臨床病理學(xué)資料的關(guān)系。
　　研究結(jié)果：
　　已有6株胰腺癌細胞中，T3M4細胞

4、hENT1表達量較低，Panc-1細胞hENT1表達量較高。選取T3M4細胞進行hENT1基因過表達，Panc-1細胞進行hENT1基因沉默，構(gòu)建穩(wěn)定過表達hENT1基因的T3M4細胞株及其陰性對照株，構(gòu)建穩(wěn)定沉默hENT1基因的Panc-1細胞株及其陰性對照株。上調(diào)hENT1基因可以增加細胞吉西他濱化療敏感性，沉默hENT1基因可以減低細胞吉西他濱化療敏感性。hENT1基因?qū)τ诩毎鲋?、遷移和侵襲無明顯影響。體內(nèi)實驗中發(fā)現(xiàn)上調(diào)hENT

5、1表達可以增強吉西他濱化療敏感性。在臨床研究方面，44例患者的腫瘤組織hENT1染色均值為119.4。以該均值為分界，定義染色小于或等于120的為hENT1低表達組，染色大于120的為hENT1高表達組。發(fā)現(xiàn)腫瘤組織hENT1表達水平和患者預(yù)后相關(guān)，hENT1高表達患者的無瘤生存時問及總體生存均明顯長于hENT1低表達患者(21.75，95％CI18.45-25.04VS12.48，95％CI10.12-14.85)(15.44，95％

6、CI11.26-14.85VS8.24，95％CI6.69-9.78)。多因素分析發(fā)現(xiàn)hENT1表達量是預(yù)后的獨立危險因素(HR0.1695％CI，0.04-0.59P=0.006)。
　　研究結(jié)論：
　　胰腺癌細胞hENT1表達量和胰腺癌吉西他濱化療預(yù)后相關(guān)，hENT1有望成為胰腺癌吉西他濱化療耐藥預(yù)測指標。
　　第二部分 CREPT與胰腺癌細胞生物學(xué)行為的關(guān)系
　　胰腺癌發(fā)病隱匿、惡性度高、預(yù)后極差。胰腺癌在

7、全部腫瘤死亡原因中排名第四，5年生存率小于5％。除胰腺癌化療耐藥外，缺乏有效的預(yù)后指標是困擾胰腺癌臨床研究的又一難題。有報道稱，CREPT(cell-cycle related and expression-elevated protein in tumor)可能與部分消化道腫瘤預(yù)后相關(guān)。但CREPT基因與胰腺癌的關(guān)系還未見報道，本研究擬通過體外及體內(nèi)實驗，系統(tǒng)探究CREPT對于胰腺癌細胞生物學(xué)行為的影響。
　　研究目的：

8、　　探究CREPT對于胰腺癌細胞生物學(xué)行為的影響。
　　研究方法：
　　檢測已有胰腺癌細胞株CREPT表達量，構(gòu)建穩(wěn)定過表達/沉默CREPT基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，檢測CREPT對胰腺癌細胞增殖、化療敏感性、遷移、侵襲的調(diào)控作用。通過裸鼠皮下種植瘤實驗，檢測CREPT基因?qū)σ认侔┘毎w內(nèi)增殖的影響。
　　研究結(jié)果：
　　通過檢測已有胰腺癌細胞中CREPT表達量，發(fā)現(xiàn)T3M4細胞CREPT表達量較高，MIA細胞CREPT

9、表達量較低。通過沉默和上調(diào)目標細胞株CREPT基因，構(gòu)建穩(wěn)定過表達CREPT基因的MIA細胞株及其對照株，和穩(wěn)定沉默CREPT基因的T3M4細胞株及其對照株。體外實驗中發(fā)現(xiàn):CREPT可以增加胰腺癌細胞吉西他濱化療耐藥性，沉默CREPT基因可以減低細胞增殖，降低細胞遷移和侵襲能力。上調(diào)CREPT基因?qū)τ诩毎鲋?、細胞遷移和侵襲能力無明顯影響;在體內(nèi)實驗中發(fā)現(xiàn)，沉默CREPT基因可以明顯減緩小鼠皮下種植瘤生長，上調(diào)CREPT基因?qū)τ谛∈笃?/p>