肺癌患者BALF中巨噬細胞和血管生成因子檢測及意義.pdf

1、肺癌是目前人類最常見的惡性腫瘤之一,具有較高的發(fā)病率和死亡率。局部侵襲和遠處轉移是肺癌患者死亡的主要原因,而這一過程常常依賴于一些促血管生成因子,如血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和白細胞介素8(interleukin8,IL-8)。已有研究表明腫瘤細胞及腫瘤組織實質和間質浸潤的炎細胞均可產生這些因子。事實上,浸潤炎細胞和促血管生成因子在肺癌腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用,然而肺

2、癌患者支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中細胞類型與數(shù)量、促血管生成因子尤其是其中巨噬細胞的免疫表型目前尚不清楚。本研究中我們收集了54例吸煙肺癌患者,包括36例鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)、9例腺癌(adenocarcinoma, AC)和9例小細胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC);13例非吸煙非特異性慢性炎

3、、7例吸煙非特異性慢性炎和8例非吸煙正常者的支氣管肺泡灌洗液,并對浸潤炎細胞的比例、巨噬細胞的免疫表型以及IL-8和VEGF表達水平進行了檢測,分析了其臨床意義,獲得如下主要研究結果及結論:
　　1.肺癌患者BALF中浸潤巨噬細胞優(yōu)勢表型為CD163+巨噬細胞。
　　(1)我們共收集54例吸煙肺癌患者,包括36例鱗狀細胞癌、9例腺癌和9例小細胞肺癌;13例非吸煙非特異性慢性炎、7例吸煙非特異性慢性炎和8例非吸煙正常者的BAL

4、F樣本,均來自于第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院,并通過倫理論證以及簽署知情同意書。
　　(2)我們應用液基薄層細胞學涂片 HE染色分析 BALF中細胞類型、數(shù)量及炎細胞比例情況。研究發(fā)現(xiàn)與正常對照相比,肺癌及非特異性慢性炎患者BALF中巨噬細胞占總炎細胞比例明顯下降,而中性粒細胞所占比例明顯升高(P<0.01)。其次,與非吸煙非特異性慢性炎相比,肺癌患者 BALF中巨噬細胞所占比例明顯下降(P<0.05),而中性粒細胞所占比例明顯升高(P<

5、0.05)。肺腺癌患者BALF中有較多淋巴細胞浸潤,而肺鱗狀細胞癌患者BALF中腫瘤細胞明顯多于腺癌及小細胞肺癌。
　　(3)進一步應用液基薄層細胞學涂片ICC染色CD68和CD163單克隆抗體鑒定分析BALF中巨噬細胞的免疫表型。研究發(fā)現(xiàn)HE染色中通過病理形態(tài)學證實的巨噬細胞均表達CD68,而其中接近一半的浸潤巨噬細胞呈現(xiàn)CD163陽性(37.4％±28.1%)。其次肺癌組和對照組BALF中巨噬細胞陽性率分別為81%和70%;而

6、小細胞肺癌患者BALF中CD163+的巨噬細胞比例明顯增高。
　　2.BALF中促血管生成因子表達水平檢測分析。
　　(1)我們應用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測 BALF樣本中促血管生成因子IL-8和VEGF的表達水平,研究發(fā)現(xiàn)與正常對照組(0.8±0.7 ng/ml, p<0.05)和非吸煙非特異性炎癥組(1.5±1.6 ng/ml, p<0.05)相比,肺癌組(5.0±5.3 ng/ml) IL-8水平明顯增高。其次,肺癌組I

7、L-8水平與總蛋白相對比值仍明顯增高[(9.1±8.9)×10-6 vs.(1.7±1.1)×10-6 and(4.2±4.0)×10-6, both p<0.05]。
　　(2)肺癌組VEGF水平無論是絕對濃度還是相對比值均高于正常對照組[(0.4±0.3 ng/ml vs.0.2±0.1 ng/ml and(8.3±4.2)×10-7 vs.(4.9±2.3)×10-7, respectively, both p<0.05]。

8、
　　(3)我們還發(fā)現(xiàn)肺鱗狀細胞癌與腺癌患者BALF中IL-8表達水平存在明顯差異,而其余不同組織學類型肺癌之間以及肺癌組與對照組之間兩者表達水平均無明顯差異。
　　3.BALF中促血管生成因子表達水平與不同類型細胞的相關性分析。
　　(1)研究發(fā)現(xiàn)非小細胞肺癌患者BALF中IL-8表達水平與浸潤中性粒細胞數(shù)目呈明顯的正相關性(p<0.01),而肺腺癌患者BALF中IL-8表達水平與浸潤淋巴細胞數(shù)目呈明顯的正相關性(p

9、<0.05)。
　　(2)我們還發(fā)現(xiàn)肺鱗狀細胞癌患者BALF中VEGF表達水平與腫瘤細胞數(shù)目呈明顯的正相關性(p<0.05),并通過肺癌組織IHC染色進一步證實腫瘤細胞表達VEGF。
　　(3)我們并未發(fā)現(xiàn)IL-8和VEGF表達水平與浸潤巨噬細胞或CD163+M2型巨噬細胞比例具有明顯的相關性。
　　綜上結果可見,肺癌患者BALF中浸潤炎細胞及促血管生成因子水平可以反映肺癌微環(huán)境狀態(tài),其檢測分析有助于肺癌早期臨床診斷。